[發(fā)明專利]一種檢測(cè)炎癥因子的蛋白質(zhì)芯片試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010157024.X
• 申請(qǐng)日: 2010-04-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101833001A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃若磐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黃若磐;廣州瑞博奧生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/544
• 分類號(hào): G01N33/544
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)炎癥因子的蛋白質(zhì)芯片試劑盒。

技術(shù)背景

炎癥是生物體排除有害刺激和促進(jìn)愈合的一種自生保護(hù)性機(jī)制，其過(guò)程涉及復(fù)雜的生化反應(yīng)，這些有害刺激包括致病原、受損細(xì)胞或刺激物等。炎癥一般表現(xiàn)為急性炎癥和慢性炎癥，其中，急性炎癥是身體對(duì)有害刺激物的最初反應(yīng)，通過(guò)提高受損組織的血漿量和白血球數(shù)得以實(shí)現(xiàn)，并伴隨有一系列連鎖生物反應(yīng)，包括局部微循環(huán)、免疫系統(tǒng)和受損組織內(nèi)各種不同的細(xì)胞；而慢性炎癥則會(huì)導(dǎo)致炎癥處細(xì)胞逐漸變化，是損傷和愈合并存的過(guò)程，可能持續(xù)數(shù)日、數(shù)月甚至數(shù)年，而且持久的慢性炎癥的也會(huì)引起周邊組織的損害。

炎癥可能引起多種人類疾病，包括過(guò)敏、哮喘、內(nèi)臟疾病、關(guān)節(jié)炎和自身免疫性疾病，研究發(fā)現(xiàn)，炎癥可能引發(fā)其它慢性疾病，如心血管疾病、肥胖癥、老年癡呆癥、抑郁癥和癌癥。其中，在在炎癥過(guò)程中，腫瘤圍繞腫塊建立一個(gè)微環(huán)境，使癌細(xì)胞激增、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移、提高癌細(xì)胞新成代謝。

炎癥的復(fù)雜生化反應(yīng)過(guò)程有多種分子參與，其中，有一類分子在炎癥過(guò)程中起到促進(jìn)作用，如白細(xì)胞介素1α、白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子α、干擾素γ、轉(zhuǎn)化促進(jìn)因子β、粒狀巨噬細(xì)胞、促進(jìn)因子、白細(xì)胞介素11、白細(xì)胞介素12、白細(xì)胞介素17。另一類分子則對(duì)抗炎癥有抑制作用，這類分子包括白細(xì)胞介素4、白細(xì)胞介素10、白細(xì)胞介素13、白細(xì)胞介素16、溶解性腫瘤壞死因子受體，當(dāng)然還有其他趨化因子也參與炎癥過(guò)程。不同疾病具有不同的炎癥因子，而檢測(cè)這些炎癥因子的表達(dá)水平不僅能幫助我們了解疾病的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，也能幫助我們找到疾病的特殊靶標(biāo)記和個(gè)體醫(yī)療生物標(biāo)志。

目前常用的炎癥因子檢測(cè)方法主要包括：酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，放射免疫分析(radio?immunoassay，RIA)，免疫印績(jī)法(western?blot)，流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometry)等。其中，酶聯(lián)免疫吸附法是最普遍的方法，具靈敏度高、特異性較好、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。但一次試驗(yàn)只能檢測(cè)單一指標(biāo)，通量低、成本高，在具有多指標(biāo)特性的炎癥因子檢測(cè)中，該方法存在明顯的不足；放射免疫分析(RIA)雖然靈敏度高，是由于具有放射性污染，現(xiàn)在已很少采用；免疫印績(jī)法能測(cè)定分子的大小，且無(wú)非特異的反應(yīng)，但操作繁瑣，靈敏度低，且只能檢測(cè)單一指標(biāo)，不適合運(yùn)用于炎癥因子的檢測(cè)；流式細(xì)胞儀能在細(xì)胞水平上檢測(cè)炎癥分子的水平，但卻存在低靈敏、低通量、高成本等缺點(diǎn)。

因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員開(kāi)始嘗試用蛋白質(zhì)芯片的方法克服上述技術(shù)方案中存在的不足，例如，現(xiàn)有技術(shù)中，采用液體芯片能夠同時(shí)檢測(cè)10至20類分子，但由于樣品間容易發(fā)生相互作用，影響檢測(cè)結(jié)果，很難發(fā)展成高通量方法，且此方法中采用的設(shè)備結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不易推廣。

有鑒于此，開(kāi)發(fā)出一種新型的炎癥因子檢測(cè)試劑盒，克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，實(shí)現(xiàn)炎癥因子檢測(cè)檢測(cè)的高通量、高靈敏度、高特異性和低成本是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種高通量、高靈敏度、高特異性和低成本的炎癥因子檢測(cè)試劑盒，采用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)，能夠檢測(cè)四十項(xiàng)炎癥因子，克服了現(xiàn)有技術(shù)操作繁瑣、檢測(cè)指標(biāo)單一、需有費(fèi)儀器、靈敏度低等缺陷，具有廉價(jià)、便利、靈敏、準(zhǔn)確、高通量、標(biāo)本用量少、能在普通實(shí)驗(yàn)室推廣和規(guī)模化等優(yōu)點(diǎn)。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的一種檢測(cè)炎癥因子的蛋白質(zhì)芯片試劑盒，包括：(1)同時(shí)固定有若干種特異性抗體的底膜，所述特異性抗體與炎癥因子能夠發(fā)生抗體-抗原反應(yīng)，每種特異性抗體分別固定于所述底膜形成若干個(gè)獨(dú)立識(shí)別位點(diǎn)；和(2)反應(yīng)劑和檢測(cè)劑，用于通過(guò)array-ELISA方法檢測(cè)待測(cè)樣品中是否存在能夠與所述特異性抗體發(fā)生抗體-抗原反應(yīng)的物質(zhì)。