[發明專利]一種檢測炎癥因子的蛋白質芯片試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201010157024.X
• 申請日: 2010-04-21
• 公開（公告）號: CN101833001A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 黃若磐
• 申請（專利權）人: 黃若磐;廣州瑞博奧生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

1.一種檢測炎癥因子的蛋白質芯片試劑盒，其特征在于包括：(1)同時固定有若干種特異性抗體的底膜，所述特異性抗體與炎癥因子能夠發生抗體-抗原反應，每種特異性抗體分別固定于所述底膜形成若干個獨立識別位點；和(2)反應劑和檢測劑，用于通過array-ELISA方法檢測待測樣品中是否存在能夠與所述特異性抗體發生抗體-抗原反應的物質。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，其中所述特異性抗體為針對選自如下蛋白質之抗體：嗜酸細胞活化趨化因子，白細胞誘素-2，粒細胞集落刺激因子，重組人粒巨噬細胞集落刺激因子，細胞間粘附分子-1，干擾素-γ，活化T細胞-種基因產物，白細胞介素-1α，白細胞介素-1β，白細胞介素-2，白細胞介素-3，白細胞介素-4，白細胞介素-6，白細胞介素-6sR，白細胞介素-7，白細胞介素-8，白細胞介素-10，白細胞介素-11，白細胞介素-12p40，白細胞介素-12p70，白細胞介素-13，白細胞介素-15，白細胞介素-16，白細胞介素-17，趨化因子干擾素誘導蛋白10，趨化蛋白-1，趨化蛋白-2，巨噬細胞集落刺激因子，趨化因子CXCL9，巨噬細胞炎性蛋白-1α，巨噬細胞炎性蛋白-1β，巨噬細胞炎性蛋白-1δ，趨化因子，轉化生長因子-β1，腫瘤壞死因子-α，腫瘤壞死因子-β，s腫瘤壞死因子受體1，s腫瘤壞死因子受體2，生長因子-BB，抑制因子金屬蛋白酶組織抑制因子-2；上述各種特異性抗體分別固定于所述底膜形成若干個獨立識別位點。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述獨立識別位點上固定有單一濃度的一種抗體，一種抗體以一種或者一種以上的濃度分別固定于底膜形成一個或者一個以上獨立識別位點。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述特異性抗體中的任意一種以0.2ng～20ng的含量點樣固定于所述獨立識別位點。

5.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：反應劑包括抗體混合液，所述抗體混合液為所述若干種特異性抗體的混合溶液，且特異性抗體標記有生物素。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述反應劑還包括用于識別生物素標記的抗生物素蛋白鏈菌素，所述抗生物素蛋白鏈菌素標記有辣根過氧化物酶。

7.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述底膜為硝酸纖維素膜、聚偏氟乙烯膜或者尼龍膜。

8.一種檢測炎癥因子的蛋白質芯片試劑盒的制備方法，有一將權利要求1或2中所述的特異性抗體固定于底膜的步驟，該步驟包括：

(1)將50-500nl的含0.5-100ng特異性抗體蛋白質的Tris緩沖液(含有0.01-10g/100ml牛白蛋白)點樣于底膜上，

(2)將點樣好的底膜放于室溫條件下靜置5分鐘到8分鐘，于2℃到8℃保存備用。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：步驟(1)中采用全自動點樣儀完成點樣操作，各特異性抗體按蛋白質芯片點陣排布于所述底膜。

10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：所述底膜為硝酸纖維素膜、聚偏氟乙烯膜或者尼龍膜。