[發(fā)明專利]一種乳腺上皮細(xì)胞的組織塊種植方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010155429.X
• 申請(qǐng)日: 2010-04-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101812428A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王楨;羅軍;王偉;趙旺生;林先滋;滕炎玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 北京匯澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11228
• 代理人: 黃挺

1.一種乳腺上皮細(xì)胞的組織塊種植方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)預(yù)處理：以血清鋪滿培養(yǎng)皿，靜置；

2)種植：在所述培養(yǎng)皿中種植乳腺組織塊，收集乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞；

3)純化：除去成纖維細(xì)胞，得到乳腺上皮細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織塊種植方法，其特征在于，步驟1)所述血清為胎牛血清。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織塊種植方法，其特征在于，步驟1)所述靜置條件為：室溫，30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織塊種植方法，其特征在于，步驟2)所述乳腺組織塊為西農(nóng)薩能羊乳腺腺泡組織塊。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織塊種植方法，其特征在于，步驟2)所述種植的步驟為：

a.清洗乳腺組織，將其切割成塊；

b.在所述培養(yǎng)皿中接種組織塊，并置于培養(yǎng)箱中，20～30分鐘；

c.向培養(yǎng)皿中加入培養(yǎng)液，1～2小時(shí)后再補(bǔ)加培養(yǎng)液，在37℃、5％CO₂、飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)兩天，第三天更換培養(yǎng)液，以后每?jī)傻饺旄鼡Q一次培養(yǎng)液，即得乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組織塊種植方法，其特征在于，所述培養(yǎng)液為含如下濃度成分的D-MEM/F-12培養(yǎng)基：體積百分比10％的FBS、5mg/L牛胰島素、5mg/L氫化可的松、5mg/L表皮生長(zhǎng)因子和10萬(wàn)IU/L的青鏈霉素雙抗。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織塊種植方法，其特征在于，步驟3)所述純化的步驟為：

a.在上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞混合物中，加入消化液，37℃消化，待成纖維細(xì)胞脫離瓶壁時(shí)，終止消化，將消化液吸出，再加入適量消化液，37℃繼續(xù)消化5～6min，加入所述培養(yǎng)液后吸管吹打懸浮細(xì)胞，離心后收集細(xì)胞；

b.在步驟a收集的細(xì)胞中加入所述培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，成纖維細(xì)胞貼壁后，將所述培養(yǎng)液吸出，將培養(yǎng)皿中細(xì)胞更換至一個(gè)新的培養(yǎng)皿中，再加入所述培養(yǎng)液，如此經(jīng)過(guò)3～4次，即可得到乳腺上皮細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組織塊種植方法，其特征在于，所述消化液為含以下濃度的成分的水溶液：胰蛋白酶0.5g/L，NaCl?8g/L，KCl?0.4g/L，葡萄糖1g/L，NaHCO3?0.58g/L，EDTA?0.2g/L，酚紅0.002g/L和青鏈霉素雙抗10萬(wàn)IU/L。