[發明專利]一種重組人血白蛋白及其融合蛋白的分離純化工藝

有效

• 申請號: 201010154987.4
• 申請日: 2010-04-26
• 公開（公告）號: CN102234332A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發明（設計）人: 聶磊;王歡;郭婷婷;蔡秀云;白驊
• 申請（專利權）人: 浙江海正藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18
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1.一種純化重組人血白蛋白的方法，該方法包括以下層析步驟：

(1)將含重組人血白蛋白的發酵上清液，進行固定化金屬螯合親和層析，

(2)將步驟(1)的產物經過疏水層析，

(3)將步驟(2)的產物經過陰離子交換層析(疏水型陰離子交換層析)。

2.根據權利要求1所述的方法，其中固定化金屬螯合親和層析填料的基質選自下列的一種或多種：瓊脂糖、纖維素、葡聚糖、聚酰胺、聚碳酸酯、聚羥乙基甲基丙烯酸酯、聚砜、聚乙烯醇、聚丙烯酸環氧烷、樹脂、或上述物質的衍生物和共聚物、或大孔硅膠、多孔玻璃、磷灰石。

3.根據權利要求2所述的方法，所述基質材料是瓊脂糖。

4.根據權利要求1所述的方法，固定化金屬螯合親和層析填料的基質上含有的配基選自：亞氨基二乙酸、三羥甲基乙二胺和次氨基三乙酸。

5.根據權利要求4所述的方法，其中配基選自三羥甲基乙二胺或亞氨基二乙酸。

6.根據權利要求1所述的方法，與固定化金屬螯合親和層析填料螯合的金屬離子選自Cu⁺⁺、Ni⁺⁺、Zn⁺⁺或Co⁺⁺。

7.根據權利要求6所述的方法，所述金屬離子為Cu⁺⁺。

8.根據前面任一權利要求所述的方法，其中在進入步驟(1)前，在穩定劑和還原劑存在的條件下，對發酵上清液進行熱處理。

9.根據前面任一權利要求所述的方法，其中在步驟(2)之前，在穩定劑，還原劑和金屬螯合劑存在下，對步驟(1)得到的產物進行熱處理。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其中穩定劑是辛酸鈉，還原劑是半胱氨酸，金屬螯合劑是EDTA。

11.根據前面任一權利要求所述的方法，其中步驟(2)所使用疏水層析介質是含有苯基、脂肪族和/或雜環為配基的疏水層析介質。

12.根據前面任一權利要求所述的方法，其中在步驟(3)之前，將步驟(2)得到的產物經過超濾膜脫鹽。