[發明專利]用高效液相色譜測定水蕨DNA甲基化含量的方法

無效

• 申請號: 201010154433.4
• 申請日: 2010-04-20
• 公開（公告）號: CN101813681A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發明（設計）人: 董元火;萬昆;張金安
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 俞鴻

1.用高效液相色譜測定水蕨DNA甲基化含量的方法，其步驟包括：

1)采集待測的水蕨樣品并提取樣品中的DNA，得到待測DNA樣品，溶解于緩沖液后于-20℃保存備用；

2)將待測DNA樣品水解并離心，取上層清液，得到待測樣品溶液；

3)配制胞嘧啶標準樣品和5-甲基胞嘧啶標準樣品的混合標準樣品溶液，在相同的高效液相色譜測定條件下，通過混合標準樣品溶液和待測樣品溶液的峰的保留時間和峰面積來確定待測DNA樣品中的DNA甲基化含量；所述高效液相色譜的流動相為質量分數為5％的甲醇溶液，質量分數為0.2％的三乙醇溶液和質量分數為94.8％且摩爾濃度為5mmol/L的戊烷磺酸鈉混合組成，并且用磷酸調節混合溶液pH值到4的混合溶液。

2.如權利要求1所述的用高效液相色譜測定水蕨DNA甲基化含量的方法，其特征在于：所述流動相的流速為1mL/min。

3.如權利要求1所述的用高效液相色譜測定水蕨DNA甲基化含量的方法，其特征在于：所述高效液相色譜的檢測器為紫外檢測器，檢測紫外光波長為273nm。

4.如權利要求1所述的用高效液相色譜測定水蕨DNA甲基化含量的方法，其特征在于：所述將待測DNA樣品水解并離心的方法為，向待測DNA樣品加入0.2mmol/L的鹽酸溶液，在80℃水浴上加熱水解2h，再加入0.4mmol/L的氫氧化鈉水溶液進行中和，最后在10000r/min的轉速下離心10min后即完成待測DNA樣品水解并離心的過程。