[發明專利]一種人血白蛋白的生產方法

有效

• 申請號: 201010152489.6
• 申請日: 2010-04-20
• 公開（公告）號: CN101851604A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 熊軍;孫利群;婁彩玲
• 申請（專利權）人: 上海新都生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C07K14/765;C07K1/14
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所 31251
• 代理人: 王法男

1.一種人血白蛋白的生產方法，其特征在于：采用由人肝細胞系或者人肝細胞中分離得到的人肝細胞株作為人血白蛋白培養母體，使人肝細胞株在細胞發生器的培養基中、運用細胞培養技術獲得富含人血白蛋白的人血白蛋白溶液，在將所獲得的人血白蛋白溶液經分子篩分離得到可用于臨床醫學使用的人血白蛋白溶液，或者進一步經冷凍干燥后獲得人血白蛋白干粉。

2.如權利要求1所述的一種人血白蛋白的生產方法，其特征在于：所述的培養基由基礎培養基和添加培養基組成，其中的基礎培養基由每升含量為：290.00mg/L?L-精氨酸、50.00mg/L?L-門冬酰胺、20.00mg/L?L-門冬氨酸、1.00mg/L鹽酸硫胺素、20.00mg/L?L-谷氨酸、10.00mg/L?甘氨酸、15.00mg/L?L-組氨酸、20.00mg/L?L-羥脯氨酸、50.00mg/L?L-異亮氨酸、0.20mg/L核黃素；40.00mg/L?L-賴氨酸鹽酸鹽、15.00mg/L?L-甲硫氨酸、15.00mg/LL-苯丙氨酸、20.00mg/L?L-脯氨酸、30.00mg/L?L-絲氨酸、20.00mg/L?L-蘇氨酸、5.00mg/L?L-色氨酸、23.19mg/L?L-酪氨酸、1.00mg/L?鹽酸吡哆醇、1.00mg/L?對氨基苯甲酸、1.00mg/L?煙酰胺、48.84mg/L?無水硫酸鎂、676.13mg/L?無水磷酸二氫鈉、400.00mg/L?氯化鉀、6000.00mg/L?氯化鈉、2000.00mg/L?葡萄糖、1.00mg/L?還原型谷胱甘肽、5mg/L?還原型輔酶Q₁₀?0.005mg/L?維生素B₁₂、0.20mg/L?生物素、0.25mg/L?D-泛酸鈣、1.00mg/L?葉酸組成；其中的添加培養基由濃度在0.2～4mML-谷氨酰胺、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸組成。

3.如權利要求1所述的一種人血白蛋白的生產方法，其特征在于：所述人血白蛋白的方法的具體制作步驟為：

A、按照培養基的組成成分進行基礎培養基的配制、并將基礎培養基的pH值調至6～8，在培養器中對基礎培養基進行121℃溫度條件下進行不少于10分鐘的殺菌處理；

B、在培養器的基礎培養基中加入1～10％體積的人血白蛋白培養母體，并加入適量濃度在0.2～4mM的多種氨基酸，讓其在15～40℃溫度、5％CO₂體積濃度的環境中，并以300rpm攪拌轉數條件下無菌培養24～48小時，獲得富含人血白蛋白細胞溶液；

C、用分子篩對B步驟獲得的人血白蛋白細胞溶液進行分離，并對所得的分離液在溫度15～40℃條件下調pH值調至6～8，得到純度在90％以上的人血白蛋白溶液；

D、用壓濾機對步驟C獲得的進行壓濾獲得純度在95％以上的人血白蛋白溶液；或者進一步經冷凍干燥后獲得人血白蛋白干粉。

4.如權利要求1所述的一種人血白蛋白的生產方法，其特征在于：所述人血白蛋白的方法的具體制作步驟為：

A、按照培養基的組成成分進行基礎培養基的配制、并將基礎培養基的pH值調至6～8，在培養器中對基礎培養基進行121℃溫度條件下進行不少于10分鐘的殺菌處理；

B、在培養器的基礎培養基中加入1～10％體積的人血白蛋白培養母體，并加入適量濃度在0.2～4mM的多種氨基酸，讓其在15～40℃溫度、5％CO₂體積濃度的環境中，并以300rpm攪拌轉數條件下無菌培養24～48小時，獲得富含人血白蛋白細胞溶液；

C、用離心機對B步驟獲得的人血白蛋白細胞溶液進行分離，并加入適量乙醇，在4℃下進行30分鐘的攪拌處理，隨后進行離心分離，除去乙醇溶劑相；再次加入4℃的冷乙醇，并在4℃下攪拌120分鐘后，通過壓濾機壓濾后獲得有效含量在82％左右的人血白蛋白細胞溶液；

D、用冷凍干燥機對C步驟獲得的提取液進行10小時以上冷卻至0℃處理，得到純度99.90％的人血白蛋白冷凍干粉。