[發明專利]一種鑒別免疫動物感染A型流感病毒的抗體間接免疫熒光試驗方法

無效

• 申請號: 201010151344.4
• 申請日: 2010-04-21
• 公開（公告）號: CN101833002A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 邵衛星;李一經;孫慶杰;魏榮;葛俊偉
• 申請（專利權）人: 東北農業大學;中國動物衛生與流行病學中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12N15/44;C12N15/866;C12N7/01;C07K14/11
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1.一種鑒別免疫動物感染A型流感病毒的抗體間接免疫熒光試驗方法，包括如下步驟：

(1)采集接種了A型流感“標記”疫苗的動物的血液，分離血清，并用PBS溶液稀釋；

(2)表達NA基因的重組桿狀病毒接種昆蟲細胞，并表達NA基因；

(3)將步驟(1)中稀釋的禽血清加入到步驟(2)中表達NA蛋白的昆蟲細胞上，室溫作用一段時間；

(4)用PBS溶液漂洗，然后加入適量FITC標記的兔抗雞二抗，室溫作用一段時間；

(5)用PBS溶液漂洗，然后加入適量碳酸甘油緩沖液，在熒光顯微鏡下觀察是否有熒光出現；

(6)根據觀察的結果判斷動物是否感染相應亞型流感病毒。

2.如權利要求1所述的鑒別免疫動物感染A型流感病毒的抗體間接免疫熒光試驗方法，其特征在于：步驟(2)中獲得接種了表達NA基因的重組桿狀病毒，具體方法如下：

①使用RT-PCR技術擴增A型流感病毒NA基因；

②把NA基因克隆到昆蟲桿狀病毒表達載體pFast-Bac中，獲得表達NA基因的重組桿狀病毒；

③把重組桿狀病毒接種到昆蟲細胞上表達NA蛋白，一段時間后，去掉細胞培養上清液，用丙酮固定細胞，直接作為抗原檢測NA血清抗體。

3.如權利要求1或2所述的鑒別免疫動物感染A型流感病毒的抗體間接免疫熒光試驗方法，其特征在于：在步驟(6)中，如果觀察無特異熒光，判為陰性，接種“標記”疫苗的動物沒有受到相應亞型流感病毒感染；如果觀察出現特異熒光，判為陽性，接種“標記”疫苗的動物受到相應亞型流感病毒感染。

4.如權利要求1、2或3所述的鑒別免疫動物感染A型流感病毒的抗體間接免疫熒光試驗方法，其特征在于：該方法是A型流感“標記”疫苗的配套檢測方法，用于鑒別接種了A型流感“標記”疫苗的動物是否感染相應亞型流感病毒；作為一種篩選方法，該方法可用于臨床血清樣品檢測，以便盡早采取相應的防控措施，有利于根除和消滅臨床上流行的相應A型流感病毒。