[發(fā)明專利]一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010150690.0
• 申請日: 2010-04-20
• 公開（公告）號: CN101787388A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬放;李旭;劉暢;楊基先;徐暘;侯寧;王金娜;代陽
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 金永煥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種篩選生物破乳菌的方法。

背景技術(shù)

生物破乳劑作為生物制劑的一種，具有破乳效率高、成本低、適應(yīng)性高、環(huán)境友好、可重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，具有廣泛的研究前景。而高效生物破乳菌的種類與數(shù)量直接關(guān)系到生物破乳劑的應(yīng)用范圍及破乳效果；目前，已報(bào)道的高效生物破乳菌的種數(shù)相對較少(生物破乳菌菌種單一)，且破乳效能低(破乳能力低于50%)，導(dǎo)致此現(xiàn)象的原因主要有，破乳菌菌源地的選取不當(dāng)；篩選技術(shù)滯后，篩選方法針對性不強(qiáng)，手段單一；篩菌過程復(fù)雜，耗時過長(初篩破乳菌時間大于3個月)，篩選效率低，僅為20%～50%。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是為了解決現(xiàn)有生物破乳菌破乳效能低，篩選技術(shù)滯后，篩選方法針對性差、操作復(fù)雜、時間長、篩選效率低的問題，而提供的一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法。

從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法按以下步驟進(jìn)行：一、向裝有150ml液體無機(jī)鹽培養(yǎng)基的三角瓶中接種活性污泥，在溫度為28～30℃、搖床轉(zhuǎn)數(shù)為140r/min的條件下培養(yǎng)7d，得富集菌液，然后轉(zhuǎn)接到新鮮的液體無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，在溫度為28～30℃、搖床轉(zhuǎn)數(shù)為140r/min的條件下培養(yǎng)7d，重復(fù)轉(zhuǎn)接3次，得菌液；二、采用藍(lán)膠平板培養(yǎng)基或油平板培養(yǎng)基對菌液進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為倒置于28～30℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48～72h，然后挑取陽性單菌落進(jìn)行劃線純化培養(yǎng)，直至得到菌落及菌體形態(tài)一致的菌株；三、將菌株接種于裝有100ml液體無機(jī)鹽培養(yǎng)基的三角瓶中，在溫度為30℃、搖床轉(zhuǎn)數(shù)為140r/min的條件下培養(yǎng)3d，得全培養(yǎng)液；四、將0.2ml經(jīng)過油紅O染色的煤油滴加到有30ml蒸餾水且直徑為10cm的培養(yǎng)皿中，煤油膜鋪開穩(wěn)定后，再向煤油膜表面滴加20μl全培養(yǎng)液，靜止30s后測定排開油圈的直徑，選取直徑d≥3.0cm的菌株；五、將步驟四中所得菌株接種于裝有100ml液體無機(jī)鹽培養(yǎng)基的三角瓶中，在溫度為30℃、搖床轉(zhuǎn)數(shù)為140r/min的條件下培養(yǎng)3d，得全培養(yǎng)液；六、向裝有5mLO/W型乳狀液的磨口具塞比色管中加入2mL步驟五中所得全培養(yǎng)液，震蕩后靜止，在室溫下進(jìn)行破乳，24h后選取排油率≥50%的菌株，即完成從活性污泥中快速篩選生物破乳菌；其中步驟一中活性污泥按體積比為25%的量接種。

本發(fā)明針對破乳菌的自身特點(diǎn)，提高富集培養(yǎng)的選擇性和針對性，將生物表面活性劑產(chǎn)生菌的篩選方法與破乳試驗(yàn)相結(jié)合，建立一套高效、簡單、周期短的快速篩選系統(tǒng)，用于曝氣池活性污泥中具有破乳能力菌株的有效篩選，可得到多種具有高效破乳能力的菌株，對豐富高效破乳菌的菌種資源以及今后大規(guī)模生物破乳劑生產(chǎn)所需工程菌的培育均具有深遠(yuǎn)的意義；利用具有明確目的性的菌株識別方法替代傳統(tǒng)的分離純化手段，將初篩破乳菌時間從大于3個月降低至1個月，極大縮短了冗長的篩菌周期；并保證活性污泥中破乳菌的篩出率可達(dá)到100%，明顯提高篩菌效率；同時解決了以往所篩出的目的菌株破乳能力低的問題，此方法更容易獲得破乳能力高于50%的菌株，進(jìn)一步馴化培養(yǎng)則可得到破乳能力高于80%的高效菌株；除此以外，該方法還具有針對性強(qiáng)，方法靈活，操作簡單易掌握的優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式，還包括各具體實(shí)施方式間的任意組合。