[發明專利]一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法

無效

• 申請號: 201010150690.0
• 申請日: 2010-04-20
• 公開（公告）號: CN101787388A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 馬放;李旭;劉暢;楊基先;徐暘;侯寧;王金娜;代陽
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

1.一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法，其特征在于從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法按以下步驟進行：一、向裝有150ml液體無機鹽培養基的三角瓶中接種活性污泥，在溫度為28～30℃、搖床轉數為140r/min的條件下培養7d，得富集菌液，然后轉接到新鮮的液體無機鹽培養基中，在溫度為28～30℃、搖床轉數為140r/min的條件下培養7d，重復轉接3次，得菌液；二、采用藍膠平板培養基或油平板培養基對菌液進行劃線分離培養，培養條件為倒置于28～30℃的生化培養箱中培養48～72h，然后挑取陽性單菌落進行劃線純化培養，直至得到菌落及菌體形態一致的菌株；三、將菌株接種于裝有100ml液體無機鹽培養基的三角瓶中，在溫度為30℃、搖床轉數為140r/min的條件下培養3d，得全培養液；四、將0.2ml經過油紅O染色的煤油滴加到有30ml蒸餾水且直徑為10cm的培養皿中，煤油膜鋪開穩定后，再向煤油膜表面滴加20μl全培養液，靜止30s后測定排開油圈的直徑，選取直徑d≥3.0cm的菌株；五、將步驟四中所得菌株接種于裝有100ml液體無機鹽培養基的三角瓶中，在溫度為30℃、搖床轉數為140r/min的條件下培養3d，得全培養液；六、向裝有5mLO/W型乳狀液的磨口具塞比色管中加入2mL步驟五中所得全培養液，震蕩后靜止，在室溫下進行破乳，24h后選取排油率≥50%的菌株，即完成從活性污泥中快速篩選生物破乳菌；其中步驟一中活性污泥按體積比為25%的量接種。

2.根據權利要求1所述的一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法，其特征在于步驟一、步驟三和步驟五中液體無機鹽培養基的成分均相同，液體無機鹽培養基由4.0g的NH₄NO₃、4.0g的K₂HPO₄、6.0g的KH₂PO₄、0.2g的MgSO₄·7H₂O、1ml的微量元素溶液、40ml的液體石蠟和1000mL的去離子水中組成，所述的微量元素溶液由1000mg的CaCl₂·2H₂O、1000mg的FeSO₄·7H₂O和1400mg的EDTA溶于1000mL的去離子水中組成。

3.根據權利要求1所述的一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法，其特征在于步驟一中活性污泥來自城市污水處理廠曝氣池。

4.根據權利要求1所述的一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法，其特征在于步驟二中藍膠平板培養基由1.0g的牛肉膏、20g的葡萄糖、5g的蛋白胨、0.2g的酵母膏和20g的瓊脂粉溶于蒸餾水1000ml中組成。

5.根據權利要求1所述的一種從活性污泥中快速篩選生物破乳菌的方法，其特征在于步驟二中油平板培養基由0.1g的(NH₄)₂SO₄、0.2g的NH₄NO₃、0.03g的MgSO₄、1g的KH₂PO₄、0.4g的Na₂HPO₄、0.05g的酵母粉、20g的瓊脂粉、浸過液體石蠟的粗濾紙和1000ml的蒸餾水組成。