[發明專利]一種全合成培養基及其制備方法和用于培養裂殖壺菌的方法

有效

• 申請號: 201010150460.4
• 申請日: 2010-04-16
• 公開（公告）號: CN101831387A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 盧英華;倪潔;周林;陳麗珠;敬科舉;喬興忠
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 陳永秀;馬應森

1.一種全合成培養基，其特征在于包括碳源、氮源、維生素和無機鹽，具體組成及含量如下：

碳源：葡萄糖60～150g/L；

氮源：丙氨酸1.8～2.2g/L、甲硫氨酸1.0～1.5g/L、半胱氨酸0.15～0.3g/L、賴氨酸0.2～0.5g/L、組氨酸1.2～1.4g/L、谷氨酸1.3～1.6g/L、谷氨酰胺1.3～1.6g/L、異亮氨酸1.2～1.5g/L、蘇氨酸0.9～1.2g/L、色氨酸1.5～1.8g/L；

維生素：VB₁?2～8mg/L，VB₁₂?8～14mg/L，生物素3～9mg/L，硫辛酸15～30mg/L，葉酸38～42mg/L；

無機鹽：NaCl?10～18g/L，KCl?0.3～0.6g/L，MgCl₂?2.0～2.5g/L，CaCl₂?0.6～0.75g/L，Na₂HPO₄?0.35g/L，KH₂PO₄?1.2g/L。

2.如權利要求1所述的一種全合成培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)在無機鹽溶液中加入碳源及氮源，調節pH至6.0～6.5，滅菌，得溶液A；

2)將維生素溶液用無菌過濾膜過濾除菌，然后再加到溶液A中，混合均勻后即得全合成培養基。

3.如權利要求2所述的一種全合成培養基的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述滅菌，是在100～120℃下高壓滅菌10～30min。

4.如權利要求2所述的一種全合成培養基的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述過濾膜的孔徑≤0.2μm。

5.如權利要求1所述的一種全合成培養基用于培養裂殖壺菌的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)菌種活化：將裂殖壺菌菌種轉接于斜面培養；

2)一級種子：用接種環挑取活化的菌種，接入裝有種子培養基的容器中培養；

3)二級種子：取一級種子，接入裝有種子培養基的容器中培養；

4)擴大培養：將二級種子以1％～4％的接種量接種于全合成培養基上培養，裂殖壺菌的生物量達到58g/L，總油脂約占細胞干重的55％，DHA產量為9.8g/L。

6.如權利要求5所述的一種全合成培養基用于培養裂殖壺菌的方法，其特征在于在步驟1)中，所述斜面培養，是在22～26℃下200r/min培養1～2天。

7.如權利要求5所述的一種全合成培養基用于培養裂殖壺菌的方法，其特征在于在步驟2)中，所述培養，是在22～26℃下200r/min培養1天。

8.如權利要求5所述的一種全合成培養基用于培養裂殖壺菌的方法，其特征在于在步驟3)中，所述種子培養基為30g/L葡萄糖，10g/L酵母膏，0.5倍濃度自然海水。

9.如權利要求5所述的一種全合成培養基用于培養裂殖壺菌的方法，其特征在于在步驟3)中，所述培養是在22～26℃下200r/min培養1天。

10.如權利要求5所述的一種全合成培養基用于培養裂殖壺菌的方法，其特征在于在步驟4)中，所述接種于全合成培養基上培養，是在22～26℃下200r/min培養3～4天。