[發明專利]一種人血清中酶活性穩定的處理方法

有效

• 申請號: 201010148822.6
• 申請日: 2010-04-16
• 公開（公告）號: CN102221490A
• 公開（公告）日: 2011-10-19
• 發明（設計）人: 陳寶榮;邵燕;孫慧穎;胡濱;陳琦;李玲;李月玲
• 申請（專利權）人: 北京航天總醫院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/42;G01N1/34
• 代理公司: 核工業專利中心 11007
• 代理人: 程旭輝

技術領域

本發明涉及醫學量值溯源領域，特別是涉及一種人體血清的處理方法。

背景技術

量值溯源是近年檢驗醫學領域的熱點問題，其目的是解決臨床常規方法測量的準確可比，核心問題在于臨床常規方法的校準品應具有溯源性和與測量樣本良好的互通性。2005年后中國已逐步建立起參考體系，校準品的溯源性問題從技術角度已基本解+決，互通性問題仍是困擾臨床常規方法測量準確可比的難題。由于人血清樣本的高度復雜性和不穩定性，尋找并建立與人血清具有很好互通性并符合穩定性要求的校準品是解決臨床酶學項目量值溯源的核心問題。

互通性是指制備物與待測量樣本在相同分析系統中進行測量時表現出的與待測量樣本在分析系統中的反應一致的特性。在檢驗醫學定量分析領域，待測量樣本為人血清，由于其成分的高度復雜性、儲存的不穩定性、來源的局限性等多種原因導致在醫學實驗室使用人血清基質樣本為校準品進行人血清樣本測量的理想測量狀況無法實現，產品制造業不得不采用與人血清具有某些相似特性的易獲取的牛血清白蛋白溶液作校準品的基質或直接對一些分子結構簡單的無機小分子采用水溶液作校準品的基質。但對于一些生物大分子類物質尤其是具有空間結構的蛋白質如酶的測量采用上述基質校準品時，常導致校準品中酶與待測量樣本人血清中同種酶在同一分析系統中表現出不一致的特性，即校準品的基質效應。這是目前醫學實驗室酶學定量測量中導致實驗室間測量變異大，缺乏準確可比性的重要原因；也是北京市政府提出檢驗結果統一、互認的最大技術障礙之一。

酶是人體內最重要的蛋白質之一，其具有復雜的空間結構，它的催化活性通過其分子結構中的催化活性中心暴露并與其催化底物結合實現催化人體內各種復雜代謝反應的作用。由于酶本質是蛋白質，多種因素如溫度、pH、離子濃度、滲透壓等變化均可致其變性，導致酶催化活性的改變或消失，實驗室通過對酶催化活性的測量可監測酶的變性與失活。因此，校準品中酶的穩定性對酶的準確測量至關重要。由于酶本身易變性和實驗室的酶測量絕大多數是基于催化活性測量的特性，校準品的基質即酶的載體對酶活性的穩定作用明顯。既往的研究有二類：一類是基于牛血清白蛋白基質的血清酶校準品和標準物質。此類校準品特點是校準品(酶活性)穩定期長，但通常有明顯的基質效應，常導致不同分析系統測量結果變異大、缺乏可比性，以此類校準品校準的各常規方法測量結果多不具有溯源性，即與國際公認的參考方法的測量結果不一致；另一類是基于人血清的校準品，此類校準品的最大問題是不穩定。目前，國內外均還沒有關于立足于采用與測量樣本基質相同的人血清有效地解決互通性問題的人血清中酶活性穩定的研究成果。

發明內容

通過研究發現人血清中含有多種蛋白質、代謝物、離子和微量元素等物質，這些物質在離體后仍會發生不斷變化，變化程度與處理過程、保存條件密切相關。某些因素的變化不導致酶活性的改變，但某些因素的微小變化都有可能導致酶活性的明顯改變或完全喪失。因此在人血清處理與保存過程中，對可能引起人血清中酶活性變化的關鍵因素進行控制是解決酶活性穩定的核心。

本發明的目的在于提供一種人血清中酶活性穩定的處理方法，立足于采用與測量樣本基質相同的人血清來有效地解決互通性問題。

為實現上述目的，本發明的及技術方案為，一種人血清中酶活性穩定的處理方法，包括以下步驟：

步驟一，血清收集：收集血液采集當日新鮮人血清，放置在密閉容器中，凍至-20——-80℃以下，在冰柜中保存；

步驟二，不穩定成分去除

(1)將裝有人血清的容器從冰柜取出，在室溫下自然放置4-8小時，至肉眼觀察容器中塊狀冰凍血清完全溶解后，在-20——-80℃以下冷凍2小時以上；

(2)將裝有人血清的容器在2-10℃下放置10小時以上，至肉眼觀察容器中塊狀冰凍血清完全溶解后，再在-20——-80℃以下冷凍2小時以上；

(3)用10——20℃水沖洗裝有人血清容器的外表面，沖至肉眼觀察容器中塊狀冰凍血清完全溶解。使人血清中引起酶活性不穩定的各種蛋白質、凝血因子、離子、代謝物等物質由易變狀態轉化為處于相對穩定的狀態；