[發(fā)明專利]檢測常見高危型人乳頭瘤病毒的方法及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010147430.8
• 申請日: 2010-03-24
• 公開（公告）號: CN102199671A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡劍英;宋慶濤
• 申請（專利權(quán)）人: 英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測臨床樣品中常見高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV，High-RiskHuman?Pappillomavirus)DNA的方法，特別是涉及使用實時聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測HPV。該方法使用分子信標熒光探針技術(shù)，能特異且靈敏地檢測出臨床樣品中13種常見的高危型人乳頭瘤病毒DNA。本發(fā)明還進一步涉及用于該臨床檢測的試劑盒。

發(fā)明背景

宮頸癌(CC)是女性最常見的惡性腫瘤之一，在女性人群中，其致死率僅次于乳腺癌。據(jù)估計，全球每年約新增病例大約473,000，每年死于宮頸癌的人數(shù)可高達253,500，約85％發(fā)生在發(fā)展中國家(http://www.nccc-online.org/)。我國每年新增病例13.15萬，約3.5萬人死于宮頸癌。近年來，隨著環(huán)境污染和社會風氣的變化，原本多發(fā)于50歲左右女性身上的宮頸癌如今也盯上了年輕女性。所以，宮頸癌的預防、診斷和治療對提高女性健康水平是非常必要的。

所幸的是，宮頸癌是一種發(fā)病原因比較清楚的惡性腫瘤，約99.7％的宮頸癌是由高危型人乳頭瘤病毒的持續(xù)或反復感染所致(Walboomers?JM，Jacobs?MV.Manos?MM，et?al.J?Pathol，1999；189(1)：50-53)。目前已確定的HPV型別已超過150個，常見的高危型有15種(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82型)(N，Bosch?FX，de?SanjoséS，Herrero?R，CastellsaguéX，Shah?KV，Snijders?PJ，Meijer?CJ(2003).N.Engl.J.Med.348(6)：518-27.)。其中，70％的宮頸癌是由HPV16、18引起的；另外，HPV31、33、35也是宮頸癌的主要致病因素(Walboomers?JM，Jacobs?MV，Manos?MM，Bosch?FX，Kummer?JA，Shah?KV，Snijders?PJ，Peto?J，Meijer?CJ，N(1999).J.Pathol.189(1)：12-9)。HPV型別分布有地域差別，在中國人群中，HPV16、52、58相對多見，而HPV73、82幾乎沒有。

過去，宮頸癌篩查的主要方法有巴氏涂片法、陰道鏡檢查法及組織活檢等，這些方法缺點明顯，靈敏度不高特異性不強。而近年來出現(xiàn)的HPV?DNA或RNA的檢測對診斷高度病變的宮頸癌的靈敏度可達80％-100％，陰性預測值幾乎是100％，所以，這種方法目前被認為是診斷宮頸癌的金標準。有研究者提出，對宮頸癌的準確診斷需要HPV?DNA或RNA檢測結(jié)果和細胞學檢測結(jié)果的綜合分析(Walboomers?JM，Jacobs?MV，Manos?MM，Bosch?FX，Kummer?JA，Shah?KV，Snijders?PJ，Peto?J，Meijer?CJ，N(1999).J.Pathol.189(1)：12-9)。

檢測HPV?DNA或RNA的常見方法包括測序法、雜交捕獲法、原位雜交法及PCR法。測序法的結(jié)果相對準確，但操作繁瑣，且對操作者的要求較高，不適于臨床應(yīng)用；雜交捕獲法如Digene公司的Hybrid?CaptureII已被美國FDA批準并已在臨床上應(yīng)用，該法假陽性的問題仍然十分嚴重，且成本高，不宜在經(jīng)濟較不發(fā)達的發(fā)展中國家推廣；原位雜交法靈敏度過低，這也就限制了其在臨床上的大規(guī)模應(yīng)用；傳統(tǒng)的PCR法(電泳鑒定結(jié)果)雖然靈敏度尚可，但擴增后的產(chǎn)物暴露容易造成交叉污染，且步驟繁瑣，臨床應(yīng)用的局限性過大。而上世紀90年代中期在傳統(tǒng)的PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的實時熒光PCR技術(shù)不但靈敏度高特異性強，自動化程度高，成本適中，幾乎不會造成污染，這些優(yōu)點無疑給人乳頭瘤病毒的早期診斷帶來了福音。