[發明專利]檢測常見高危型人乳頭瘤病毒的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201010147430.8
• 申請日: 2010-03-24
• 公開（公告）號: CN102199671A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: 蔡劍英;宋慶濤
• 申請（專利權）人: 英科新創(廈門)科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于檢測常見高危型人乳頭瘤病毒DNA的試劑盒，該試劑盒由(1)宮頸樣本中人乳頭瘤病毒DNA提取試劑；(2)聚合酶鏈反應混合液；(3)酶混合液；(4)陽性對照和(5)陰性對照樣品組成，特征在于其中所使用的正和反向引物是：

(1)5’-CTGAYCCCAATAAATTTGGTTTTCCWGA-3’(SEQ?ID?NO：1)

(2)5’-CTGATCCAAATAAATTTGGGTTACCTGA-3’(SEQ?ID?NO：2)

(3)5’-CAGATCCTAATAAGTTTGGRCTTCCRGA-3’(SEQ?ID?NO：3)

(4)5’-AGGGTATTTCGCGTGACATTGCCC-3’(SEQ?ID?NO：4)

(5)5’-AGAGTGTTTAGGGTTACCTTACCTG-3’(SEQ?ID?NO：5)

(6)5’-CTAAGGCCAACACCYAAWGGCT-3’(SEQ?ID?NO：6)

(7)5’-TGACCACTTATGCCAACGC-3’(SEQ?ID?NO：7)

(8)5’-CTAAGGCCAACACCAAGGGGCT-3’(SEQ?ID?NO：8)

(9)5’-AYAATGGATGGCCACTGAGYC-3’(SEQ?ID?NO：9)

其中Y＝C/T；W＝A/T；R＝A/G。

所使用的分子信標探針序列為：

(10)5’-FAM-CCCGGGGCCTGTGTWGGTGTTGACCGGG-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：10)

(11)5’-FAM-CGCGTGTGGGCCTGTGCTGACGCG-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：11)

(12)5’-FAM-TGGGCCTGTGTTGGTTTAGAGCCCA-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：12)

(13)5’-FAM-TGGGCATGTGTAGGCCTTGCCCA-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：13)

(14)5’-FAM-GGCTGGTKTGGGCCTGTACAGCC-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：14)

(15)5’-FAM-TGGGCTTGTGTAGGGGTGCCCA-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：15)

(16)5’-FAM-TGGGCATGTGTAGGTWTGGAGCCCA-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：16)

(17)5’-FAM-CGCGTTGGTGTGGGGTTGTGTGGAACGCG-DABCYL-3’(SEQ?ID?NO：17)

其中W＝A/T；K＝T/G，

2.根據權利要求1的試劑盒，其中所說的常見高危型人乳頭瘤病毒是指中國人群中常見的宮頸癌相關人乳頭瘤病毒，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68共13種型。

3.根據權利要求1的試劑盒，其中所說的宮頸樣本是指用無菌棉拭子或宮頸刷取的疑似人乳頭瘤病毒感染患者的宮頸脫落細胞，以及用于活檢的組織標本或疣組織，這些樣本需在低于4℃的環境下運送到檢測實驗室，并置于-70℃或-20℃冷凍保存。

4.根據權利要求1的試劑盒，其中所說的人乳頭瘤病毒DNA提取試劑由提取液A、提取液B和提取液C組成。

5.根據權利要求1的試劑盒，其中所說的聚合酶鏈反應混合液由10×PCR緩沖液、dUTPs、正和反向引物、分子信標探針組成。

6.根據權利要求1的試劑盒，其中所說的酶混合液由普通Taq酶(Tag?DNA聚合酶)和UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)組成。

7.根據權利要求1的試劑盒，其中所說的陽性對照是指經過測序確認過的含試劑盒檢測范圍內的高危型HPV?DNA片段的質粒。

8.根據權利要求1的試劑盒，其中所說的陰性對照是高壓滅菌水。