[發(fā)明專利]利用巨大芽孢桿菌制備去甲基雷帕霉素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010146740.8
• 申請日: 2010-04-09
• 公開（公告）號: CN101851648A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃捷;程元榮;楊國新;金東偉;余輝;李夸良;陳夏琴;陳有鐘
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C12P17/14
• 分類號: C12P17/14;C07D498/18;C12R1/11
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 丁秀麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種去甲基雷帕霉素的制備方法。

背景技術(shù)

雷帕霉素(Rapamycin；西羅莫司，Sirolimus)是吸水鏈霉菌AY?B-994和吸水鏈霉菌FC904發(fā)酵產(chǎn)生的具有免疫抑制、抗真菌、抗增殖和抗腫瘤活性的大環(huán)內(nèi)酯化合物(圖1)，哺乳動物雷帕霉素靶位(mammalian?target?of?rapamycin?C1，簡稱mTORC1)抑制劑。已作為腎移植抗排斥藥物、預(yù)防和治療支架植入后冠狀動脈再狹窄的雷帕霉素涂層支架應(yīng)用于臨床；正作為抑制mTOR信號傳導(dǎo)途徑的抗腫瘤藥物(抗白血病、乳腺癌、胃癌、腸癌、肝癌等)進(jìn)行研究或臨床試驗；最新研究表明，雷帕霉素具有延長老齡小鼠生命周期的作用。

作為mTORC1抑制劑雷帕霉素衍生物的化學(xué)半合成研究也取得成效。雷帕霉素43位分別被乙二醇、乙氧基、四氮唑取代的半合成衍生物依維莫司(Everolimus，RAD001)、比奧莫司(BiolimusA9)、Zotarolimus均已作為藥物支架的涂層應(yīng)用于臨床。依維莫司、替西羅莫司(Temsirolimus，CCI-779，43位被丙二酯取代)已由FDA分別于2007年8月和2009年3月批準(zhǔn)應(yīng)用于晚期腎癌的治療，對其他癌癥的治療也已進(jìn)入臨床試驗階段；Deforolimus(AP23573，43位由亞磷酸取代)抗癌作用已進(jìn)入臨床試驗階段，如已完成肉瘤III期、乳腺癌II期的臨床試驗。

采用與本發(fā)明類似的技術(shù)獲得去甲基雷帕霉素的報道極為有限。游動放線菌ATCC63771(Actinoplanes?sp.ATCC?63771)將雷帕霉素轉(zhuǎn)化為7-O-去甲基雷帕霉素和42-O-去甲基雷帕霉素(US?PATENT，5849730，1998年12月15日)；鏈霉菌NCIMB40515(Streptomyces?sp.NCIMB40515)轉(zhuǎn)化雷帕霉素為42-O-去甲基雷帕霉素；龜裂鏈霉菌ATCC?28893(Streptomyces?rimosus?ATCC?28893)轉(zhuǎn)化雷帕霉素為7-O-去甲基雷帕霉素、29-O-去甲基雷帕霉素和42-O-去甲基雷帕霉素(Enzyme?and?Microbial?Technology，21：405～412，1997)；Streptomyces?toyocaensis?ATCC?39471轉(zhuǎn)化雷帕霉素為42-O-去甲基雷帕霉素(Journal?of?Antibiotics，48：657～666，1995)。已報道的對雷帕霉素具有轉(zhuǎn)化能力的微生物菌株還有：Gliocladium?celiquescens?ATCC10097，Trichothecium?roseum?ATCC?12519、Syncephalastrum?nigricans?ATCC?12266、Syncephalastrum?racemosus?ATCC?1332B、Absidiaglauca?ATCC?7852、Aspergillus?alliaceus?ATCC?10060、Cunninghamella?baineri?ATCC?36252、Botrytis?elliptica?ATCC?11787、Cheatomium?cochliodes?ATCC?10195、Thamnidium?elegansATCC?8997、Streptomyce?aureofaciens?ATCC?10762、Streptomyce?lavandulae?ATCC?55209、Nocardia?asteroids?ATCC?3318、Saccharopolyspora?eythrea?ATCC?1163、游動放線菌ATCC53771、Bacillus?subtilis?ATCC?55060(Enzyme?and?Microbial?Technology，21：405～412，1997)及游動放線菌ATCC?12065(海峽藥學(xué)，20：98～101，2008)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供更方便、環(huán)保、有效的去甲基雷帕霉素，特別是雙去甲基雷帕霉素的制備方法。

本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：將巨大芽孢桿菌接種于斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，再接入種子培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后將種子培養(yǎng)液接入轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基。待巨大芽孢桿菌在轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中繁殖后，加入底物雷帕霉素，經(jīng)巨大芽孢桿菌對雷帕霉素的轉(zhuǎn)化，獲得巨大芽孢桿菌轉(zhuǎn)化雷帕霉素的轉(zhuǎn)化液，轉(zhuǎn)化液中包含29，42-O-雙去甲基雷帕霉素、42-O-去甲基雷帕霉素及29-O-去甲基雷帕霉素及其他雷帕霉素衍生物。