[發明專利]利用巨大芽孢桿菌制備去甲基雷帕霉素的方法

無效

• 申請號: 201010146740.8
• 申請日: 2010-04-09
• 公開（公告）號: CN101851648A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 黃捷;程元榮;楊國新;金東偉;余輝;李夸良;陳夏琴;陳有鐘
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C12P17/14
• 分類號: C12P17/14;C07D498/18;C12R1/11
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 丁秀麗

技術領域

本發明涉及一種去甲基雷帕霉素的制備方法。

背景技術

雷帕霉素(Rapamycin；西羅莫司，Sirolimus)是吸水鏈霉菌AY?B-994和吸水鏈霉菌FC904發酵產生的具有免疫抑制、抗真菌、抗增殖和抗腫瘤活性的大環內酯化合物(圖1)，哺乳動物雷帕霉素靶位(mammalian?target?of?rapamycin?C1，簡稱mTORC1)抑制劑。已作為腎移植抗排斥藥物、預防和治療支架植入后冠狀動脈再狹窄的雷帕霉素涂層支架應用于臨床；正作為抑制mTOR信號傳導途徑的抗腫瘤藥物(抗白血病、乳腺癌、胃癌、腸癌、肝癌等)進行研究或臨床試驗；最新研究表明，雷帕霉素具有延長老齡小鼠生命周期的作用。

作為mTORC1抑制劑雷帕霉素衍生物的化學半合成研究也取得成效。雷帕霉素43位分別被乙二醇、乙氧基、四氮唑取代的半合成衍生物依維莫司(Everolimus，RAD001)、比奧莫司(BiolimusA9)、Zotarolimus均已作為藥物支架的涂層應用于臨床。依維莫司、替西羅莫司(Temsirolimus，CCI-779，43位被丙二酯取代)已由FDA分別于2007年8月和2009年3月批準應用于晚期腎癌的治療，對其他癌癥的治療也已進入臨床試驗階段；Deforolimus(AP23573，43位由亞磷酸取代)抗癌作用已進入臨床試驗階段，如已完成肉瘤III期、乳腺癌II期的臨床試驗。

采用與本發明類似的技術獲得去甲基雷帕霉素的報道極為有限。游動放線菌ATCC63771(Actinoplanes?sp.ATCC?63771)將雷帕霉素轉化為7-O-去甲基雷帕霉素和42-O-去甲基雷帕霉素(US?PATENT，5849730，1998年12月15日)；鏈霉菌NCIMB40515(Streptomyces?sp.NCIMB40515)轉化雷帕霉素為42-O-去甲基雷帕霉素；龜裂鏈霉菌ATCC?28893(Streptomyces?rimosus?ATCC?28893)轉化雷帕霉素為7-O-去甲基雷帕霉素、29-O-去甲基雷帕霉素和42-O-去甲基雷帕霉素(Enzyme?and?Microbial?Technology，21：405～412，1997)；Streptomyces?toyocaensis?ATCC?39471轉化雷帕霉素為42-O-去甲基雷帕霉素(Journal?of?Antibiotics，48：657～666，1995)。已報道的對雷帕霉素具有轉化能力的微生物菌株還有：Gliocladium?celiquescens?ATCC10097，Trichothecium?roseum?ATCC?12519、Syncephalastrum?nigricans?ATCC?12266、Syncephalastrum?racemosus?ATCC?1332B、Absidiaglauca?ATCC?7852、Aspergillus?alliaceus?ATCC?10060、Cunninghamella?baineri?ATCC?36252、Botrytis?elliptica?ATCC?11787、Cheatomium?cochliodes?ATCC?10195、Thamnidium?elegansATCC?8997、Streptomyce?aureofaciens?ATCC?10762、Streptomyce?lavandulae?ATCC?55209、Nocardia?asteroids?ATCC?3318、Saccharopolyspora?eythrea?ATCC?1163、游動放線菌ATCC53771、Bacillus?subtilis?ATCC?55060(Enzyme?and?Microbial?Technology，21：405～412，1997)及游動放線菌ATCC?12065(海峽藥學，20：98～101，2008)。

發明內容

本發明的目的在于提供更方便、環保、有效的去甲基雷帕霉素，特別是雙去甲基雷帕霉素的制備方法。

本發明的目的通過如下技術方案實現：將巨大芽孢桿菌接種于斜面培養基培養后，再接入種子培養基培養，然后將種子培養液接入轉化培養基。待巨大芽孢桿菌在轉化培養基中繁殖后，加入底物雷帕霉素，經巨大芽孢桿菌對雷帕霉素的轉化，獲得巨大芽孢桿菌轉化雷帕霉素的轉化液，轉化液中包含29，42-O-雙去甲基雷帕霉素、42-O-去甲基雷帕霉素及29-O-去甲基雷帕霉素及其他雷帕霉素衍生物。