[發明專利]熒光定量PCR檢測馬秋波病毒的方法

無效

• 申請號: 201010146462.6
• 申請日: 2010-04-12
• 公開（公告）號: CN101805802A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發明（設計）人: 姚李四;燕清麗;張曉龍
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

1.一種熒光定量PCR引物用于制備檢測馬秋波病毒的試劑的用途，其特 征在于，利用實時熒光定量PCR檢測技術，通過設計一對引物和探針對 病毒樣本進行實時定量檢測，所設計引物和探針序列如下：

2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述引物和探針的獲得步驟 為：(1)篩選馬秋波病毒S片段全長序列，進行同源性比對，并在其保守 區設計引物，(2)根據PCR擴增區域內的核苷酸序列設計特異性探針， 并提交GENEBANK檢測探針的特異性；對馬秋波病毒的檢測步驟為：首 先提取病毒核酸，然后進行病毒核酸的RT-PCR擴增，最后利用所設計的 引物和探針對待檢測物進行實時熒光定量PCR檢測。

3.如權利要求2所述的用途，其特征在于，所述RT-PCR擴增具體為配制 一定組分濃度的25μLPCR反應體系。

4.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述樣本包括鼠肺RNA。

5.如權利要求1所述的用途，其特征在于，在所述實時熒光定量PCR檢 測技術中，所述探針上連接的熒光基團包括FAM-BHQ、MGB、 FAM-TAMARA。

6.如權利要求5所述的用途，其特征在于，所述RT-PCR反應通過使用 ABI實時PCR系統、BioRad實時PCR檢測系統、Stratagene定量多聚酶 鏈反應儀來完成。