[發(fā)明專利]檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的方法及其酶聯(lián)免疫試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010144849.8
• 申請(qǐng)日: 2010-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN101968485A
• 公開（公告）日: 2011-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳家旭;郭儉;蔡玉春;陳木新;陳韶紅;田利光
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/52;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 上海世貿(mào)專利代理有限責(zé)任公司 31128
• 代理人: 嚴(yán)新德

1.一種檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的方法，其特征在于：所述的方法中包括一個(gè)制備抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的特異IgY多克隆抗體的步驟，包括一個(gè)采用雜交瘤技術(shù)制備抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的單克隆抗體的步驟，包括一個(gè)選取用于包被固相載體的抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的特異IgY多克隆抗體的步驟，包括一個(gè)選取用于制備酶結(jié)合物的抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的單克隆抗體的步驟，在上述步驟均實(shí)行之后，將待測(cè)血清樣品滴于包被好的抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的特異IgY多克隆抗體的固相載體中，保溫反應(yīng)并洗滌后，加入酶標(biāo)記抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的單克隆抗體，保溫反應(yīng)并洗滌后，形成抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的特異IgY多克隆抗體-循環(huán)抗原-酶標(biāo)抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的單克隆抗體夾心復(fù)合物，加入底物顯色，終止顯色后通過(guò)酶標(biāo)儀讀數(shù)，確定樣品陰陽(yáng)性結(jié)果。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的方法，其特征在于：所述的制備抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的特異IgY多克隆抗體的步驟中又包括如下步驟，

1)制備日本血吸蟲的可溶性抗原；

2)抗原免疫及雞蛋的收集；

3)抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的特異IgY多克隆抗體的提取與純化。

3.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的方法，其特征在于：所述的采用雜交瘤技術(shù)制備抗血吸蟲可溶性蟲卵抗原的單克隆抗體的步驟中又包括如下步驟，

1)一個(gè)動(dòng)物免疫的步驟，在所述的動(dòng)物免疫的步驟中，先制備日本血吸蟲的可溶性抗原，然后通過(guò)日本血吸蟲的可溶性抗原免疫動(dòng)物；

2)一個(gè)細(xì)胞融合的步驟；

3)一個(gè)雜交瘤細(xì)胞篩選和克隆化的步驟；

4)將單克隆細(xì)胞株注入動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體的步驟；

5)一個(gè)純化抗血吸蟲可溶性抗原的單克隆抗體的步驟；

6)一個(gè)標(biāo)記抗血吸蟲可溶性抗原的單克隆抗體的步驟。

4.一種檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒包括了包被有包被捕獲抗體的酶標(biāo)板、包被緩沖液、酶標(biāo)記物、濃縮洗滌液、樣品稀釋液、血吸蟲病陽(yáng)性血清、血吸蟲病陰性血清、顯色液、終止液。

5.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的濃縮洗滌液為0.01～0.05mol/L，pH值為7.0～7.4，含有1％吐溫20的0.3％疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖液。

6.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的樣品稀釋液為洗滌緩沖液，所述的洗滌緩沖液為濃縮洗滌液的18-22倍稀釋的工作液。

7.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的酶標(biāo)記物為辣根過(guò)氧化物酶或者堿性磷酸酶。

8.如權(quán)利要求7所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的酶標(biāo)記物為辣根過(guò)氧化物酶，顯色液為過(guò)氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺，終止液為2mol/L的硫酸。

9.如權(quán)利要求7所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的酶標(biāo)記物為堿性磷酸酶，顯色液為4-硝基酚磷酸鹽緩沖液，終止液為1mol/L氫氧化鈉緩沖液。

10.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的血吸蟲病陽(yáng)性血清為血吸蟲病人血清或?qū)嶒?yàn)感染血吸蟲家兔血清，所述的血吸蟲病陰性血清為健康人血清或正常兔血清。

11.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的酶標(biāo)板為96孔可拆卸聚苯乙烯酶標(biāo)板。

12.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述的包被緩沖液為pH值為9.6的0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液。

13.一種小鼠雜交瘤細(xì)胞，其保藏號(hào)為CGMCC?NO：3642。

14.一種血吸蟲可溶性抗原的單克隆抗體，其特征在于：由權(quán)利要求13所述的小鼠雜交瘤細(xì)胞CGMCC?NO：3642產(chǎn)生。