[發(fā)明專利]檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的方法及其酶聯(lián)免疫試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010144849.8
• 申請(qǐng)日: 2010-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN101968485A
• 公開（公告）日: 2011-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳家旭;郭儉;蔡玉春;陳木新;陳韶紅;田利光
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/52;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 上海世貿(mào)專利代理有限責(zé)任公司 31128
• 代理人: 嚴(yán)新德

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，尤其涉及一種血吸蟲病的快速診斷方法，特別是一種檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的方法及其酶聯(lián)免疫試劑盒。

背景技術(shù)

1、免疫診斷在日本血吸蟲病防治中的重要性

血吸蟲病是一種廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)的人獸共患寄生蟲病，全球76個(gè)國家和地區(qū)的約2億人口受感染，有6億人口受感染威脅。我國是日本血吸蟲病流行區(qū)，建國初期曾嚴(yán)重影響了人們的正常生產(chǎn)和生活。經(jīng)過50多年的防治，已經(jīng)取得了舉世矚目的成就，到2003年全國共有血吸蟲病病人數(shù)843007人，較建國初期(1161.2萬人)減少了92.74％。已有廣東、上海、福建、廣西、浙江等5省(區(qū)、市)阻斷了血吸蟲病的傳播；僅剩湖南、湖北、江西、安徽、江蘇等5省湖區(qū)及川、滇山區(qū)未得到控制。我們?cè)谛老驳耐瑫r(shí)，也面臨著進(jìn)一步防治工作的巨大挑戰(zhàn)。隨著防治工作的深入，人群感染度不斷下降，低度流行區(qū)擴(kuò)大，血吸蟲病的病原學(xué)診斷在現(xiàn)場(chǎng)大范圍的應(yīng)用越來越困難，不但敏感性差、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且不易被群眾和工作人員接受。另一方面，現(xiàn)在控制血吸蟲病的主要手段是吡喹酮化療，但大規(guī)模、反復(fù)單一藥物化療，可能產(chǎn)生藥物抗性，據(jù)國外報(bào)道，已經(jīng)出現(xiàn)具吡喹酮抗性的曼氏血吸蟲株，因此研制用于血吸蟲病低度流行區(qū)的敏感性和特異性更高的診斷手段已經(jīng)被列為第三大世界血吸蟲病防治規(guī)劃優(yōu)先研究項(xiàng)目。

2、循環(huán)抗原在日本血吸蟲病免疫診斷中的作用

經(jīng)過幾十年的發(fā)展，血吸蟲病免疫診斷技術(shù)已具有較高的敏感性、特異性和可行性。檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗體是一種成本低、操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)，也是目前現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查時(shí)應(yīng)用最廣的途徑，但循環(huán)抗體在治療后相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)仍保持較高水平，不易區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，無法在現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用時(shí)確定目標(biāo)化療人群；而且難以反映藥物療效，不宜用作療效考核的評(píng)價(jià)指標(biāo)。另一種途徑是檢測(cè)循環(huán)抗原，循環(huán)抗原(circulating?antigen，CAg)是存在于患者血液、唾液、尿液等體液中的血吸蟲蟲體的代謝產(chǎn)物及分泌物，檢測(cè)患者血清或尿液中的循環(huán)抗原，可評(píng)估蟲負(fù)荷數(shù)和活動(dòng)性感染，可以作為診斷的依據(jù)。而且，在治療后，CAg轉(zhuǎn)陰較快，檢測(cè)循環(huán)抗原可以作為療效考核的依據(jù)，基于循環(huán)抗原檢測(cè)的各種方法層出不窮，但都困擾在敏感性低、特異性不強(qiáng)的問題上，因此尋找敏感性高、特異性強(qiáng)的循環(huán)抗原檢測(cè)方法和技術(shù)是血吸蟲病免疫診斷的新方向。

3、IgY用作免疫診斷抗體的可行性

卵黃免疫球蛋白(egg?yolk?immunoglobulin，IgY)是鳥類、兩棲和爬行類動(dòng)物主要的免疫球蛋白。IgY是一種系統(tǒng)型抗體，可根據(jù)抗原分子的大小結(jié)合1～2個(gè)抗原，顯示為單價(jià)或二價(jià)。IgY相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為180000，沉降系數(shù)約為7.8，包含2個(gè)重鏈(H)和2個(gè)輕鏈(L)，重鏈相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為68000，比IgG(H)(Mr50000)稍重。IgY的免疫學(xué)特性：(1)由于種系發(fā)生距離相差很大，禽類IgY與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白之間不會(huì)發(fā)生交叉血清學(xué)反應(yīng)。(2)不與類風(fēng)濕因子(Rheumatoid?factors，RF)結(jié)合。(3)不會(huì)激活補(bǔ)體系統(tǒng)。(4)不結(jié)合細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面Fc受體，使得IgY在雙重免疫組化方面比IgG更具優(yōu)勢(shì)。(5)與IgG幾無交叉反應(yīng)，常用于循環(huán)復(fù)合物的測(cè)定.基于以上優(yōu)點(diǎn)，IgY技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，特別是一些免疫診斷技術(shù)如沉淀反應(yīng)、免疫電泳、ELISA、免疫電鏡和免疫印跡，表明IgY完全可以取代傳統(tǒng)的IgG。免疫十天后，在雞體內(nèi)即可獲得高滴度的抗體，而且效價(jià)穩(wěn)定，可以持續(xù)6-28周。另外，免疫雞的飼養(yǎng)簡(jiǎn)單，花費(fèi)少，符合3個(gè)RS[替代(replacing)、減少(reducing)、改善(refining)]的動(dòng)物保護(hù)原則，減少了對(duì)動(dòng)物的傷害。鑒于IgY的產(chǎn)量大、穩(wěn)定性好、獨(dú)特的免疫學(xué)特性以及動(dòng)物種系發(fā)生學(xué)距離遠(yuǎn)等優(yōu)點(diǎn)，被稱為最有潛力的哺乳動(dòng)物抗體替代品。

4.單克隆抗體技術(shù)在血吸蟲病免疫診斷技術(shù)中的應(yīng)用

自Kohler和Milstein(1975)發(fā)明單克隆抗體制備技術(shù)以來，單抗技術(shù)廣泛運(yùn)用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，為疾病的發(fā)生、發(fā)展、診斷和治療提供了重要的手段。單克隆抗體是由一個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的，其成分(類，亞類，型和結(jié)合P位等)是同源的，只針對(duì)復(fù)雜抗原的一個(gè)抗原決定簇，并有相同的親和性，抗體滴度也很高，檢測(cè)循環(huán)抗原具有高度的特異性，抗原和單抗可規(guī)模化生產(chǎn)，方法簡(jiǎn)便實(shí)用，且具有較好的療效考核價(jià)值，可區(qū)分現(xiàn)癥感染與既往感染，可用于血吸蟲病的免疫診斷和流行病學(xué)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查。

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