[發明專利]一種應用黃原膠菌株提高黃原膠產量的方法

無效

• 申請號: 201010144222.2
• 申請日: 2010-04-12
• 公開（公告）號: CN102212490A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 孫萬貴
• 申請（專利權）人: 淄博中軒生化有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12P19/04;C12R1/64
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 辛向東

技術領域

本發明涉及黃原膠菌株的應用領域，具體來說是涉及應用黃原膠菌株提高黃原膠產量的方法。

背景技術

黃原膠的產量取決于黃原膠菌株的產膠率，為了獲得高產菌株，需要對菌種進行選育。菌種的選育有幾種方法，包括自然選育、誘變育種，其中自然選育方法比較緩慢，而且過程比較的被動，在制備過程中有很大的局限性，誘變育種則具有速度較快、收效較為明顯的特點，但產率低，因而現有黃原膠的產量很低。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供了一種應用黃原膠菌株來提高產量的方法，可以提高黃原膠的產膠率，降低成本，同時縮短了生產時間。

為了解決上述技術問題，本發明采取如下方法：

1、菌種選育：包括培養基的制備和菌株的選育方法。

斜面培養基的制備：向試管中加入蔗糖、氯化鈉、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、瓊脂，攪拌均勻，將試管傾斜保存，制備成斜面培養基，各成分的百分比為：蔗糖1-2.5%、氯化鈉0.6-1.0%、蛋白胨0.5-3%、牛肉膏0.1-0.5%、酵母膏0.4-0.8%、瓊脂2-3.5%，用0.1%HCl溶液培養基的PH值調整為7.2-7.4；其中成分最佳百分比為：蔗糖1.5%、氯化鈉0.8%、蛋白胨1.5%、牛肉膏0.3%、酵母膏0.65%、瓊脂2.5%?，培養基的PH為7.2。

發酵培養基的制備：在斜面培養基中加入淀粉、碳酸鈣、豆粉，攪拌均勻，制備成發酵培養基，各成分的百分比為：淀粉3-5%、碳酸鈣0.6-1.1%、豆粉0.4-0.8%?，用0.1%HCl溶液將培養基PH值調整為7.2-7.4；成分的最佳百分比為：淀粉4%、碳酸鈣0.8%、豆粉0.6%，培養基PH為7.2。

（2）、選育菌株的方法：

①、用原始菌液制備黃單胞菌懸液：首先用濃度為100-300微克/毫升的亞硝酸鹽對原始菌液處理30分鐘，然后將處理過的菌液采用平板稀釋的方法進行分離，并于25-35℃的條件下，在無菌室的斜面培養基內培養2-4天，篩選其中個大、飽滿的菌落，并移植到另一個斜面培養基上培養，待其成熟后，放入備搖瓶中；其中亞硝酸鹽的最佳濃度為200微克/毫升，培養的最適溫度為30℃。

②、篩選菌落：從備搖瓶中選取8-10個黃單胞菌落在發酵培養基中進行初步篩選，而后經復篩，在選取4-6個質量優良的菌落，進行上罐反復實驗，選取所需的黃單胞菌（Xanthomonas?SP）X.C-237。

本發明所篩選的黃原膠菌株為黃單胞菌（Xanthomonas?SP）X.C-237，已于2010年02月01日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，登記入冊編號為CGMCC?No.3625，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。

黃單胞菌的生理特性為：微黃色、短桿狀，適宜生長溫度為27-30℃，高于50攝氏度死亡，適宜的PH值范圍在6.8-7.1。

2、菌株發酵

（1）、在一級種子罐進行發酵：

將斜面培養基各組分按配比依次投入加好水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，在溫度120-123℃、壓力0.1-0.12Mpa的條件下采用酒精溶液進行實消，時間為42-50?min，然后降溫至27-29℃，在無菌條件下，由接種口接入黃單胞菌種，培養17-20h，當菌體數量較多、生長飽滿時轉種。

（2）、在二級種子罐進行發酵：

將斜面培養基各組分按配比要求依次投入加好水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，在溫度120-123℃、壓力0.1-0.12Mpa的條件下采用酒精溶液進行實消，時間為42-50?min，然后降溫至27-29℃，在無菌條件下，將無雜菌的一級種子罐中的種液按1：10比例壓入二級種子罐中，接種黃單胞菌后在27-29℃的條件下培養17-20h，當菌體數量較多、生長飽滿時轉種。

（3）、在發酵罐內進行發酵：

按發酵培養基配比的要求進行配料，將配好的物料壓入發酵罐中，在溫度120-123℃、壓力0.1-0.12Mpa的條件下采用85%的酒精進行實消，時間為42-50min，然后降溫至27-29℃，在無菌條件下，將二級種子罐中的種液壓入發酵罐中，27-29℃的條件下培養63-67h，用NDJ-1粘度計測定粘度，當粘度不再升高時停罐。

3、提取

將發酵液升溫到80℃維持25-35min，然后將發酵液降溫到40℃后，加入到濃度為85％的酒精溶液中，使黃原膠呈纖維狀沉淀析出，用離心機分離，多次酒精沉淀脫水后真空干燥，然后粉碎制得產品。