[發(fā)明專利]一種應(yīng)用黃原膠菌株提高黃原膠產(chǎn)量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010144222.2
• 申請日: 2010-04-12
• 公開（公告）號: CN102212490A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫萬貴
• 申請（專利權(quán)）人: 淄博中軒生化有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12P19/04;C12R1/64
• 代理公司: 濟南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 辛向東

1.一種應(yīng)用黃原膠菌株提高黃原膠產(chǎn)量的方法，其特征在于：所述的黃原膠菌株為黃單胞菌（Xanthomonas?SP）X.C-237，已于2010年02月01日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，登記入冊編號為CGMCC?No.3625，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種應(yīng)用黃原膠菌株提高黃原膠產(chǎn)量的方法，其特征在于：所述方法分為以下幾步：

（1）菌種的選育

㈠、培養(yǎng)基的制備

斜面培養(yǎng)基的制備：向試管中加入蔗糖、氯化鈉、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、瓊脂，攪拌均勻，將試管傾斜保存，制備成斜面培養(yǎng)基，各成分的百分比為：蔗糖1-2.5%、氯化鈉0.6-1.0%、蛋白胨0.5-3%、牛肉膏0.1-0.5%、酵母膏0.4-0.8%、瓊脂2-3.5%，培養(yǎng)基的PH值調(diào)整為7.2-7.4；

發(fā)酵培養(yǎng)基的制備：在斜面培養(yǎng)基中加入淀粉、碳酸鈣、豆粉，攪拌均勻，制備成發(fā)酵培養(yǎng)基，各成分的百分比為：淀粉3-5%、碳酸鈣0.6-1.1%、豆粉0.4-0.8%?，培養(yǎng)基PH值調(diào)整為為7.2-7.4；

㈡、選育菌株的方法：

①、用原始菌液制備菌懸液：首先用濃度為100-300微克/毫升的亞硝酸鹽對原始菌液處理30分鐘，然后將處理過的菌液采用平板稀釋的方法進行分離，并于25-35℃的條件下，在無菌室的斜面培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)2-4天，篩選其中個大、飽滿的菌落，并移植到另一個斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待其成熟后，放入備搖瓶中。

②、篩選菌落：從備搖瓶中選取8-10個菌落在發(fā)酵培養(yǎng)基中進行初步篩選，而后經(jīng)復(fù)篩，在選取4-6個質(zhì)量優(yōu)良的菌落，進行上罐反復(fù)實驗，選取所需的黃單胞菌（Xanthomonas?SP）X.C-237予以保留；

（2）、菌株發(fā)酵

㈠、在一級種子罐內(nèi)發(fā)酵：

將上述斜面培養(yǎng)基各組分按配比依次投入加好水的一級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，在溫度120-123℃、壓力0.1-?0.12Mpa的條件下采用酒精溶液進行實消，時間為42-50?min，然后降溫至27-29℃，在無菌條件下，由接種口接入黃單胞菌種，培養(yǎng)17-20h，當(dāng)菌體數(shù)量較多、生長飽滿時轉(zhuǎn)種；?

㈡、在二級種子罐內(nèi)發(fā)酵：

將上述斜面培養(yǎng)基各組分按配比要求依次投入加好水的二級種子罐中，攪拌均勻使其溶解，在溫度120-123℃、壓力0.1-?0.12Mpa的條件下采用酒精溶液進行實消，時間為42-50?min，然后降溫至27-29℃，在無菌條件下，將無雜菌的一級種子罐中的種液按1：10比例壓入二級種子罐中，接種黃單胞菌后在27-29℃的條件下培養(yǎng)17-20h，當(dāng)菌體數(shù)量較多、生長飽滿時轉(zhuǎn)種；

?㈢、在發(fā)酵罐內(nèi)進行發(fā)酵：

按上述發(fā)酵培養(yǎng)基配比的要求進行配料，將配好的物料壓入發(fā)酵罐中，在溫度120-123℃、壓力0.1-?0.12Mpa的條件下采用酒精溶液進行實消，時間為42-50min，然后降溫至27-29℃，在無菌條件下，將二級種子罐中的種液全部壓入發(fā)酵罐中，27-29℃的條件下培養(yǎng)63-67h，用NDJ-1粘度計測定粘度，當(dāng)粘度不再升高時停罐；

（3）、提取

將發(fā)酵液升溫到80℃后維持25-35min，然后將發(fā)酵液降溫到40℃后，加入到濃度為85％的酒精溶液中，使黃原膠呈纖維狀沉淀析出，用離心機分離離心20-30min，多次酒精沉淀脫水后真空干燥，然后粉碎制得產(chǎn)品。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種應(yīng)用黃原膠菌株提高黃原膠產(chǎn)量的方法的方法，其特征在于：在步驟（1）中的斜面培養(yǎng)基成分最佳百分比為：蔗糖1.5%、氯化鈉0.8%、蛋白胨1.5%、牛肉膏0.3%、酵母膏0.65%、瓊脂2.5%?，培養(yǎng)基的PH為7.2；發(fā)酵培養(yǎng)基成分的最佳百分比為：淀粉4%、碳酸鈣0.8%、豆粉0.6%，培養(yǎng)基PH為7.2。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種應(yīng)用黃原膠菌株提高黃原膠產(chǎn)量的方法的方法，其特征在于：步驟（1）中的亞硝酸鹽的最佳濃度為200微克/毫升，培養(yǎng)的最適溫度為30℃。