[發明專利]β-葡聚糖酶活力的測定方法

無效

• 申請號: 201010144060.2
• 申請日: 2010-04-12
• 公開（公告）號: CN101819138A
• 公開（公告）日: 2010-09-01
• 發明（設計）人: 張永勤;葉慶國;王哲平;張洪妮;曾凡偉;張杰;王斐
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種β-葡聚糖酶活力的測定方法，其特征是；

A，制作用MBTH法測得的葡萄糖的吸光度值與其相應濃度的標準對應關系曲線；

B，用MBTH法檢測待測β-葡聚糖酶水解β-葡聚糖后產生的相當于葡萄糖的吸光度值；根據上一步驟制作的葡萄糖濃度與測得的相應的吸光度值之間的標準對應關系曲線確定待測β-葡聚糖酶的酶解產物中在單位時間內所產生的相當于葡萄糖的還原糖的含量，以此來推算β-葡聚糖酶的活力。

2.根據權利要求1所述的β-葡聚糖酶活力的測定方法，其特征是；上述步驟A的具體步驟是；分別取6-15組具有不同濃度的葡萄糖標準溶液0.6mL，濃度范圍在0-30微克/毫升之間，加入0.6mL?0.5當量的NaOH溶液，混勻，再加入MBTH試劑0.6mL于75-85℃水浴加熱8-20min后趁熱加入硫酸鐵銨試劑1.2mL，室溫冷卻后于波長620-680nm處測定吸光度值；每個濃度做三個平行樣；以上加量可按比例增減；根據每組葡萄糖濃度與測得的吸光度值之間的關系繪制標準對應關系曲線；

3.根據權利要求1或2所述的β-葡聚糖酶活力的測定方法，其特征是；上述步驟B的具體步驟是；將終濃度為1-5mg/mL的預熱至測定溫度的β-葡聚糖溶液，加入到預熱至相應溫度的β-葡聚糖酶溶液中開始水解反應，酶解溫度為25-40℃，水解時間為60min以內，將該酶解液與等體積的0.5當量的NaOH溶液迅速混合以終止反應，可在反應過程中分階段取樣，從中取1.2mL加入到試管中做三個平行樣，再加入MBTH試劑0.6mL于75-85℃水浴加熱5-20min后趁熱加入硫酸鐵銨試劑1.2mL，室溫冷卻后于波長620-680nm處測定吸光度值，根據步驟A制作的葡萄糖濃度與測得的相應吸光度值之間的標準對應關系曲線確定酶解產物中所含有的相當于葡萄糖的還原糖濃度，以此來推算β-葡聚糖酶的活力；β-葡聚糖酶的活力單位可被定義為在上述條件下，每毫升反應體系每分鐘產生1nmol相當于葡萄糖的量所需的酶量為一個酶活力單位；其中MBTH試劑的制法是3mg/mL的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙溶液和1mg/mL的二硫蘇糖醇溶液等體積混合即得，現用現配，一天內有效。

4.根據權利要求3所述的β-葡聚糖酶活力的測定方法，其特征是；上述硫酸鐵銨試劑的制法是0.5％FeNH₄(SO₄)₂·12H₂O，0.5％氨基磺酸，0.5當量鹽酸。

5.根據權利要求3所述的β-葡聚糖酶活力的測定方法，其特征是；上述β-葡聚糖酶溶液以50mM的丁二酸或醋酸溶液為溶劑。

6.根據權利要求3所述的β-葡聚糖酶活力的測定方法，其特征是；上述測定吸光度值的最佳波長為650nm。