[發(fā)明專(zhuān)利]抗蝰蛇蛇毒凍干血清及制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010141970.5
• 申請(qǐng)日: 2010-04-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101816789A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范泉水;鄭穎;邱薇;張富強(qiáng);葉鋒平;周衛(wèi)國(guó);張志曉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 成都軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心軍事醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/395
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/395;A61K35/16;A61P39/02;A61P37/08
• 代理公司: 昆明科陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 53111
• 代理人: 孫山明

1.抗蝰蛇蛇毒凍干血清的制備方法，包括以下步驟：

（1）將至少兩個(gè)產(chǎn)地不同亞種采集的蝰蛇蛇毒混合作為免疫原免疫馬得到特異性IgG血漿；

（2）取以上免疫血漿，加入硫酸銨，使硫酸銨終濃度為50％，待硫酸銨完全溶解后離心，取沉淀，以無(wú)菌水溶解后，加入硫酸銨，使硫酸銨的終濃度為33％，待硫酸銨完全溶解后離心，取沉淀，加入適量無(wú)菌水溶解，透析后離心，上清為IgG溶液，經(jīng)0.45μm膜過(guò)濾上層析柱進(jìn)行純化；

（3）將步驟（2）IgG溶液用無(wú)菌水補(bǔ)體積至原血漿體積的一半，按每100?mL加入0.2?mL甲苯，以6?mol·L^-1?鹽酸調(diào)pH值至3.5，按每1000?mL加入0.1?g胃蛋白酶，置31?℃，4～6h，然后以5?mol·L^-1氫氧化鈉調(diào)pH值至5.2，置57℃保持30?min，待溫度降至45℃以下后離心，上清為F(ab′)₂粗品；

（4）將以上F(ab′)₂粗品用3mol·L^-1硫酸銨調(diào)節(jié)電導(dǎo)至100-110ms/cm后上預(yù)先用pH7.0、1.2?mol·L^-1硫酸銨＋50?mmol·L^-1磷酸鈉緩沖液平衡好的Phenyl-Sepharose?low-sub?FF柱，用該pH?7.0緩沖液淋洗1-3倍柱床體積后，用注射用水線性梯度0%—100%3倍柱床體積洗脫，收集洗脫1峰，將收集洗脫峰產(chǎn)物經(jīng)Sephadex?G-25柱脫鹽或8000-10000Da超濾脫鹽后0.22?μm膜過(guò)濾除菌凍干，獲得F(ab′)₂凍干品；

以上抗蛇毒血清Phenyl-Sepharose?low-sub??FF柱層析結(jié)果經(jīng)活性和純度檢測(cè)，活性集中在洗脫1峰，SDS－PAGE純度大于85%；小分子雜蛋白集中在穿透峰、洗脫2、洗脫3峰上。