[發明專利]纖維蛋白(原)降解產物(FDP)測定試劑盒(膠乳免疫比濁法)

有效

• 申請號: 201010140329.X
• 申請日: 2010-03-29
• 公開（公告）號: CN101833010A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 謝永華;朱美萍;許付
• 申請（專利權）人: 上海太陽生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86;G01N33/531
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 魏曉波;逯長明

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種采用膠乳免疫比濁法檢測纖維蛋白(原)降解產物(FDP)含量的試劑盒。

背景技術

纖維蛋白溶解系統，簡稱纖溶系統，是人體最重要的抗凝系統，對保持血管壁的正常通透性，維持血液的流動狀態和組織修復起著重要作用，由4種主要部分組成：纖溶酶原、纖溶酶原激活劑(如t-PA、u-PA)、纖溶酶、纖溶酶抑制物。纖維蛋白(原)降解產物(Fibrin(ogen)Degradation?Products，FDP)是在纖溶系統被激活后產生的纖溶酶的作用下，人體內的纖維蛋白原和纖維蛋白被降解，所產生的各種二聚體、多聚體及復合物的統稱，生成的FDP反映機體纖溶活性的總水平。

纖溶系統的激活有多種途徑，主要分為內激活、外激活和外源性激活途徑。內激活途徑是在內源性凝血途徑中凝血因子XIIa使激肽釋放酶原轉變激肽釋放酶，激肽釋放酶使單鏈尿激酶型纖溶酶原激活物轉變為雙鏈尿激酶型纖溶酶原激活物，從而激活纖溶酶原變為纖溶酶，表現為繼發性纖溶亢進；而外激活途徑是通過血管內皮細胞釋放組織型纖溶酶原激活物(t-PA)，將纖溶酶原裂解成為纖溶酶，表現為原發性纖溶亢進。另外，外源性激活途徑是通過外界進入體內的溶栓藥物如SK、UK和t-PA等，將纖溶酶原激活成纖溶酶。在纖溶酶的存在下，纖維蛋白原和纖維蛋白降解成各種可溶片段，形成纖維蛋白降解產物(FDP)。由此可見，體內FDP水平在原發性和繼發性纖溶亢進均可升高，是綜合反映纖溶亢進的敏感指標，同時FDP的檢測也可以反映溶栓藥物的治療療效。

近幾年來，FDP含量的檢測在臨床診斷、篩查上應用廣泛，其含量升高可證明有纖溶亢進，如惡性腫瘤、彌散性血管內凝血、深靜脈血栓形成、肺栓塞、嚴重細菌感染、慢性肝病、器官移植的排斥反應、妊娠高血壓綜合癥等疾病所致的繼發性及原發性纖溶亢進，FDP含量均出現升高。在溶栓藥物的治療過程中，大量纖溶酶的生成，加速血栓的溶解，血液中FDP升高，對血清或血漿FDP濃度的檢測，可以監控溶栓藥物的治療效果。另由于血管內凝血，纖溶異常，大量FDP經腎臟排出或由于腎炎導致纖維蛋白在腎小管沉積同時繼發激活纖維蛋白降解系統生成FDP從尿中排出，因此尿液中出現FDP也意味著體內或腎臟有血管內凝血和纖溶現象。動態地觀察尿FDP的變化，對腎移植后排斥反應的診斷有重要意義。因此，檢測樣本包括血清、血漿、尿液中FDP的含量對纖溶系統疾病的早期、快速、準確診斷及對溶栓藥物治療的療程監測和療效考核具有重要的應用價值。

目前在臨床上使用的FDP檢測方法有：乙醇膠試驗、魚精蛋白副凝試驗、乳膠凝集法、酶聯免疫吸附(ELISA)法和膠乳免疫比濁法等。但都存在一定局限性。

乙醇膠試驗、魚精蛋白副凝試驗是只能通過與FDP產物中X、Y片段產生凝塊，對FDP進行定性檢測；乳膠凝集法雖具有快速，操作簡便、費用不高等優點，但是其靈敏度低，通過肉眼觀察，僅能檢出5μg/ml水平的FDP，常用于定性或半定量測定作為篩查；酶聯免疫吸附(ELISA)法雖具有靈敏度高，檢測結果準確可靠，是一種經典的方法，但是操作要求嚴格費時，檢測成本高，易受多種因素影響，不適用于臨床病人和急診病人及時診斷及治療的需要。

膠乳免疫比濁法具有操作簡便、快速、檢測靈敏度高、特異、定量準確等優點，在臨床應用上得到廣泛認可。但現有市場上采用該法測定纖維蛋白(原)降解產物(FDP)含量的試劑盒在樣本FDP濃度低于2.5μg/ml時一般不能準確定量，檢測靈敏度欠佳。

發明內容

本發明的目的是針對現有膠乳免疫比濁法檢測FDP的方法敏感度低的缺陷，提供一種定量檢測血漿、血清、尿液等樣本中FDP含量，且操作簡單、快速、定量準確、敏感度更高的診斷試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明是這樣實現的：

一種采用膠乳免疫比濁法檢測FDP含量的試劑盒，包含試劑R1、試劑R2、稀釋液、FDP校準品。

本發明所述試劑R2為抗人FDP抗體膠乳試劑，所述抗人FDP抗體膠乳試劑的制備包含以下步驟：

步驟1：將抗人FDP抗體在pH值為2.5-3.0的溶液中進行酸化；

步驟2：將步驟1所得溶液用堿溶液調節pH至7.5-8.0，加入粒徑為100-200nm的聚乙烯基芐基氯膠乳溶液，在20-25℃攪拌0.5-2小時，再在37℃孵育2-4小時；

步驟3：將步驟2所得溶液用pH值為7.5-8.5的封閉液在37℃封閉1-8小時；

步驟4：將步驟3所得溶液經離心后，取沉淀用含有穩定劑和防腐劑的緩沖液洗滌分散后即得。