[發(fā)明專利]一種血管瘤病變型J亞群禽白血病突變體病毒株及其構(gòu)建方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010140193.2
• 申請(qǐng)日: 2010-03-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101831408A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖明;張賀楠;曹偉勝;賴漢漳;羅開(kāi)健;徐成剛;辛朝安
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/00;C12N7/08;C12N15/85;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

1.一種血管瘤病變型J亞群禽白血病突變體病毒株，該病毒株為J亞群禽白血病感染性克隆化病毒rSCAU-HN06，已于2009年11月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：V200914。

2.權(quán)利要求1所述血管瘤病變型J亞群禽白血病突變體病毒株的構(gòu)建方法，其特征在于該病毒株是采用核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1～4所示特異性引物，通過(guò)重疊PCR技術(shù)對(duì)J亞群禽白血病感染性病毒rSCAU-HN06進(jìn)行E元件缺失，構(gòu)建而得。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述構(gòu)建方法，其特征在于該方法包括如下步驟：

(1)特異性引物

特異性引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1～4所示；

(2)采用重疊PCR技術(shù)將血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒SCAU-HN06株的基因CalI-NotI之間的E序列缺失，并構(gòu)建為質(zhì)粒，所述血管瘤病變型J亞群禽白血病病毒SCAU-HN06株的基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示；

(3)將步驟(2)中所得質(zhì)粒用CalI，NotI雙酶切消化，所得片段與pSK-ALV-HN經(jīng)CalI-NotI雙酶切消化的載體片段連接，得到pSK-ALV-HN-ΔE質(zhì)粒；

(3)將pSK-ALV-HN-ΔE質(zhì)粒轉(zhuǎn)染病毒宿主細(xì)胞，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，收獲細(xì)胞培養(yǎng)上清，用該上清感染雞胚成纖維細(xì)胞后進(jìn)行盲傳，從而得到所需血管瘤病變型J亞群禽白血病突變體病毒株。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述構(gòu)建方法，其特征在于步驟(3)中所述病毒宿主細(xì)胞為禽類(lèi)細(xì)胞。