[發(fā)明專利]抗福美雙單克隆抗體和快速檢測(cè)福美雙的試紙及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010139695.3
• 申請(qǐng)日: 2010-04-06
• 公開（公告）號(hào): CN101825632A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王金花;羅海峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中華人民共和國(guó)北京出入境檢驗(yàn)檢疫局;北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/558;G01N33/544
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 程泳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)藥檢測(cè)領(lǐng)域，利用免疫化學(xué)技術(shù)快速檢測(cè)殘留的農(nóng) 藥，具體地，本發(fā)明涉及一種雜交瘤細(xì)胞株，以及所述雜交瘤細(xì)胞株 產(chǎn)生的抗福美雙單克隆抗體。本發(fā)明還涉及一種檢測(cè)福美雙的組合物、 一種檢測(cè)福美雙的試紙、所述試紙的制備方法、一種檢測(cè)福美雙的酶 聯(lián)免疫試劑、以及所述抗福美雙單克隆抗體在檢測(cè)福美雙中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

福美雙(Thiram)，CAS登記號(hào)為137-26-8化學(xué)名稱為四甲基秋 蘭姆二硫化物，屬硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥，是一種具有保護(hù)作用的殺 菌劑，其抗菌譜廣，可處理種子和土壤，防治禾谷類黑穗病和多種作 物的苗期立枯病，噴灑后可防治一些果樹，蔬菜病害。

目前對(duì)食品中福美雙殘留常用的檢測(cè)方法主要為色譜分析方法， 如高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、以及色質(zhì)譜聯(lián)用法 (HPLC-MS-MS和GC-MS)。

色譜技術(shù)對(duì)福美雙檢測(cè)是非常有效、準(zhǔn)確和靈敏的，但也存在如 下缺點(diǎn)：(1)樣品預(yù)處理需要衍生化，程序繁瑣費(fèi)時(shí)；(2)需要專 業(yè)的技術(shù)人員操作，操作人員要有豐富的相關(guān)經(jīng)驗(yàn)，必須了解影響色 譜分析的各種干擾因素，了解所使用的預(yù)處理方法的優(yōu)缺點(diǎn)，才能獲 得可靠的分析結(jié)果；(3)需要昂貴的儀器設(shè)備輔助，難以在中小城市 以及中小企業(yè)中普及；(4)儀器維護(hù)和保養(yǎng)的技術(shù)要求高。保養(yǎng)是否 得當(dāng)，會(huì)直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性；(5)檢測(cè)費(fèi)用高。

本發(fā)明制備了抗福美雙單克隆抗體，并應(yīng)用該抗體制備一種特異 性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、能夠快速準(zhǔn)確地檢測(cè)福美雙的試紙，以 克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCC No.3580，保藏日期2010年1月13日，保藏單位是中國(guó)微生物菌種保 藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路 1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，該雜交瘤細(xì)胞株建議的分 類命名為：BALA/C小鼠抗-福美雙單克隆抗體骨髓瘤雜交細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及一種抗福美雙單克隆抗體，其由保藏編 號(hào)為CGMCC?No.3580的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。該抗福美雙單克隆抗體具 有很好的特異性。

本發(fā)明的還一個(gè)方面涉及一種檢測(cè)福美雙的組合物，其中含有上 述的抗福美雙單克隆抗體。

本發(fā)明的還一方面涉及一種檢測(cè)福美雙的試紙，其含有有效量的 上述的抗福美雙單克隆抗體。所述抗體可以以多種方式標(biāo)記，例如熒 光標(biāo)記。優(yōu)選地，所述抗福美雙單克隆抗體用膠體金標(biāo)記。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述試紙具有福美雙-載體蛋白偶聯(lián) 物構(gòu)成的檢測(cè)線，優(yōu)選地，所述試紙還具有抗鼠IgG抗體構(gòu)成的質(zhì)控 線。

在本發(fā)明中，所述檢測(cè)線為福美雙-載體蛋白偶聯(lián)物形成的條帶， 所述質(zhì)控線為抗鼠IgG包被形成的條帶，這兩個(gè)條帶的寬度并不特別 限定。檢測(cè)線和質(zhì)控線的距離并不特別限定，優(yōu)選5-8mm。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述試紙包括：

樣品墊(1)、結(jié)合墊(2)、蛋白結(jié)合膜(3)、吸水墊(4)和 背襯(7)，并且所述樣品墊(1)、結(jié)合墊(2)、蛋白結(jié)合膜(3)、 吸水墊(4)沿水平方向依次粘附在背襯(7)上(如圖2所示)；

其特征在于，

所述結(jié)合墊(2)上包被有上述的抗福美雙單克隆抗體，所述抗福 美雙單克隆抗體用膠體金標(biāo)記；

所述蛋白結(jié)合膜(3)上分別包被有福美雙-載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成 的檢測(cè)線(5)和抗鼠IgG抗體構(gòu)成的質(zhì)控線(6)。優(yōu)選地，所述檢 測(cè)線(5)與質(zhì)控線(6)的間距為5-8mm。

在本發(fā)明中，所述蛋白結(jié)合膜的作用為結(jié)合包被的蛋白(例如， 福美雙-載體蛋白偶聯(lián)物或者抗體)，然后包被的蛋白與待檢測(cè)物質(zhì) 反應(yīng)，因此可以選用具有該作用的任何材料，包括但不限于：硝酸纖 維素膜、PVDF膜等。優(yōu)選地，蛋白結(jié)合膜為硝酸纖維素膜。

在本發(fā)明中，所述載體蛋白為能夠與福美雙偶聯(lián)的任何蛋白，包 括但是不限于：人血清白蛋白、牛血清白蛋白、或卵清蛋白。優(yōu)選地， 載體蛋白為牛血清白蛋白。

在本發(fā)明中，所述背襯可以選用多種起支持作用的材料，例如， 其可以是PVC背襯。