[發明專利]一種殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201010136512.2
• 申請日: 2010-03-26
• 公開（公告）號: CN101838330A
• 公開（公告）日: 2010-09-22
• 發明（設計）人: 朱家勇;馬艷;金小寶;李小波;梅寒芳;吳強;褚夫江;盧雪梅;王艷
• 申請（專利權）人: 廣東藥學院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;A61K38/18;A61P31/00;A61P17/02;A61K38/16
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.根據權利要求1所述的殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白中包含殺菌/通透性增強蛋白的功能性N端肽序列、疏水性多肽接頭和人酸性成纖維細胞生長因子的肽序列。

3.根據權利要求2所述的殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白，其特征在于所述多肽接頭是(Gly₄Ser)₃。

4.權利要求1～3所述殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白的制備方法，其特征在于包括如下步驟：根據已公布的殺菌/通透性增強蛋白基因和人酸性成纖維細胞生長因子基因序列，獲得殺菌/通透性增強蛋白BPI23和人酸性成纖維細胞生長因子haFGF，通過基因重疊延伸拼接法，得到了中間帶有疏水性多肽接頭的殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合基因，將其克隆至表達載體pPICZαA中，構建了殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白表達載體，再轉化至畢赤酵母菌X-33中，獲得工程菌株，通過表達條件的優化，該菌株高效表達殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白。

5.根據權利要求4所述殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)合成殺菌/通透性增強蛋白BPI₂₃和人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白haFGF的cDNA序列，根據Genebank公布的BPI?cDNA和haFGF?cDNA的序列，設計兩對引物P1～P4，擴增出殺菌/通透性增強蛋白的功能性N端片段和人酸性成纖維細胞生長因子基因序列，引物序列如SEQ?ID?NO：2～5所示；

(2)設計兩對引物P5～P8，引物序列如SEQ?ID?NO：6～9所示，其中，P5和P6用于擴增殺菌/通透性增強蛋白的功能性N端片段基因序列，P7和P8用于擴增人酸性成纖維細胞生長因子基因序列，通過基因重疊延伸拼接法，將擴增得到的兩段基因通過多肽接頭DNA序列進行體外基因重組，合成融合基因，序列如SEQ?ID?NO：10所示；

(3)將融合基因克隆入載體pPICZαA中，構建殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白表達載體；

(4)將表達載體轉化至畢赤酵母菌X-33中，獲得工程菌株，通過表達條件的優化，該菌株高效表達殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白。

6.權利要求1～3所述殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白在制備抗菌藥或抑菌藥中的應用。

7.權利要求1～3所述殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白在促進成纖維細胞增殖中的應用。

8.權利要求1～3所述殺菌/通透性增強蛋白-人酸性成纖維細胞生長因子融合蛋白在制備促進傷口愈合的藥物中的應用。