[發明專利]一株具有雙重噬菌體抗性的L-苯丙氨酸生產菌及其選育方法

有效

• 申請號: 201010135604.9
• 申請日: 2010-03-30
• 公開（公告）號: CN102010848A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 陳堅;堵國成;劉龍;王靜;周海巖;李江華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/01;C12N13/00;C12P13/22;C12R1/19
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.一種L-苯丙氨酸生產菌，其特征在于：該菌株具有對重組大腸桿菌易感染噬菌體BP-1(CCTCC?M?2010054)和BP-2的(CCTCC?M?2010055)雙重抗性；含有重組質粒，質粒上攜帶L-苯丙氨酸合成酶基因，現已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏時間2010年1月18日，保藏編號為CCTCC?M2010013。

2.根據權利要求1所述兩種噬菌體BP-1和BP-2，其特征在于，噬菌體BP-1來源于本實驗室前期開發的L-苯丙氨酸生產菌WSH-ZH06(CCTCC?M2010009)受到噬菌體污染的裂解液，噬菌體BP-1已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏時間2010年3月15日，保藏編號為CCTCC?M?2010054；噬菌體BP-2來源于本實驗室開發的L-苯丙氨酸生產菌WSH-BR42(CCTCC?M2010008)受到噬菌體污染的裂解液，WSH-BR42具有噬菌體BP-1的抗性，但不具有噬菌體BP-2的抗性，噬菌體BP-2已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏時間2010年3月15日，保藏編號為CCTCC?M?2010055。

3.根據權利要求1所述重組質粒，其特征在于，其上攜帶L-苯丙氨酸合成的關鍵酶CM/PDT和DS的基因phe^Afbr和aroF^wt。

4.一種選育噬菌體抗性L-苯丙氨酸生產菌的方法，其特征在于，對容易受到噬菌體污染的大腸桿菌宿主菌分別進行紫外線誘變處理、噬菌體淘汰培養后，篩選到一株具有BP-1和BP-2噬菌體雙重抗性的大腸桿菌宿主菌，隨后用編碼L-苯丙氨酸合成酶基因的質粒轉化上述大腸桿菌宿主菌，得到具有噬菌體雙重抗性的L-苯丙氨酸生產用重組大腸桿菌。

5.根據權利要求4所述噬菌體淘汰培養方法，其特征在于，在紫外線誘變處理后，紅燈下在培養皿中分別吸取一定含量菌液于裝有LB培養基和噬菌體BP-1以及BP-2裂解液的三角瓶中培養一段時間，使得誘變后不具有噬菌體BP-1和BP-2抗性的菌被淘汰，具有雙重噬菌體抗性的菌得到富集。