[發明專利]用αD珠蛋白基因作為雞的高載氧能力的分子標記及其檢測方法與應用

無效

• 申請號: 201010134700.1
• 申請日: 2010-03-29
• 公開（公告）號: CN101824414A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 茍瀟;吳常信;楊舒黎;張浩;魏澤輝;嚴達偉;趙桂英;韓樹鑫;李帥
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司 53115
• 代理人: 康珉

1.一種用α^D珠蛋白基因作為雞的高載氧能力的分子標記，它的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示，在所述的序列表中SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列的第251bp處有1個A/C的堿基突變，記為A251C，導致BSEG?I-RFLP多態性。

2.一種擴增權利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作為雞的高載氧能力的分子標記的引物對，所述引物對的DNA序列如下所示：

正向引物F：5′GCTGCCACCATGCTGACTGC?3′

反向引物R：5′AACCCCAAGATCCCCTGACCTGAG?3′。

3.一種制備權利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作為雞的高載氧能力的分子標記的方法，其特征是：

(1)從藏雞和低地雞樣本的血液中提取雞基因組DNA，用權利要求2所述的引物對在所提取的雞基因組DNA中進行PCR擴增；

(2)PCR擴增片段大小為513bp，PCR產物經純化回收和測序，將藏雞和低地雞的序列進行序列比對，獲得藏雞的核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?No：1所示，其中位于該片段251bp處存在A/C堿基突變，記為A251C，A251C突變引起了BSEG?I酶切位點GGATGnn`多態；

(3)PCR產物經限制性內切酶BSEG?I酶切并通過瓊脂糖電泳進行基因型分型，當251bp處的堿基都為A時，BSEG?I識別該位點，記為AA型220bp+258bp+35bp，當251bp處的堿基都為C時，BSEG?I酶不能識別該位點，記為CC型478bp+35bp，雜合記為AC型478bp+220bp+258bp+35bp。

4.一種檢測權利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作為雞的高載氧能力的分子標記的方法，其特征是：

(1)從待測雞樣本的雞血液中提取雞基因組DNA，用權利要求2所述的引物對在所提取的雞基因組DNA中進行PCR擴增；

(2)取步驟(1)的PCR產物加入限制性內切酶BSEG?I進行酶切，酶切片段經瓊脂糖凝膠電泳分析，在凝膠成像系統觀察并記錄酶切分型結果；當251bp處的堿基都為A時，BSEG?I識別該位點，記為AA型220bp+258bp+35bp，當251bp處的堿基都為C時，BSEG?I酶不識別該位點，記為CC型478bp+35bp，雜合記為AC型478bp+220bp+258bp+35bp；

(3)檢測結果判定：如果待測雞個體基因型為CC型478bp+35bp，則該雞個體具有α^D珠蛋白基因作為雞的高載氧能力的分子標記，該雞個體為具有高載氧能力的個體；基因型為AA型220bp+258bp+35bp，則該雞個體為具有正常載氧能力的個體；基因型為AC型478bp+220bp+258bp+35bp，則該雞個體為雜合個體。

5.權利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作為雞的高載氧能力的分子標記在藏優雜交雞的標記輔助選擇中的應用。