[發明專利]一種酪氨酸磷酸化肽的純化方法無效
| 申請號： | 201010133263.1 | 申請日： | 2010-03-26 |
| 公開（公告）號： | CN102199189A | 公開（公告）日： | 2011-09-28 |
| 發明（設計）人： | 鄒漢法;韓廣輝;葉明亮;王春麗 | 申請（專利權）人： | 中國科學院大連化學物理研究所 |
| 主分類號： | C07K1/14 | 分類號： | C07K1/14 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 馬馳 |
| 地址： | 116023 *** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酪氨酸 磷酸化 純化 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種酪氨酸磷酸化肽的純化方法，其特征在于：基于β-消除和Michael親核加成反應不能將酪氨酸磷酸化肽中的磷酸基團消除的特性；具體是利用β-消除和Michael親核加成反應消除掉蛋白酶解液中非酪氨酸磷酸肽上的磷酸修飾基團，然后再用磷酸肽富集材料富集未發生消除反應的酪氨酸磷酸化肽。
2.按照權利要求1所述的純化方法，其特征在于：所述非酪氨酸磷酸肽是指絲氨酸磷酸肽和/或蘇氨酸磷酸肽。
3.按照權利要求1所述的純化方法，其特征在于：
具體操作過程為，
1)富集蛋白酶解液樣品中的磷酸肽；
2)β-消除和Michael親核加成反應：
A.將去離子水、乙醇、DMSO、4-6M?NaOH和飽和Ba(OH)2以0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.09-0.11體積比例混合，得混合液，然后向混合液中通氬氣除去溶液中的氧氣；
B.按磷酸肽濃度為0.1-100μg/μl，將磷酸肽溶解于混合液中，繼續通氬氣，加入β-巰基乙醇，β-巰基乙醇與混合液的體積比例為0.9-1.1∶0.9-1.1；搖勻后放置到80-95℃的水浴中，同時將氬氣在液面上吹掃，反應≥5小時；
C.待反應結束后，將上述溶液用TFA溶液調pH＜7，然后向其中加入體系溶液1-5倍體積的ACN混勻，得產物溶液；
3)富集產物溶液中的磷酸肽。
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