[發明專利]一種促性腺激素的純化方法

有效

• 申請號: 201010132785.X
• 申請日: 2010-03-12
• 公開（公告）號: CN101792482A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發明（設計）人: 萬龍巖;周金
• 申請（專利權）人: 麗珠醫藥集團股份有限公司;上海麗珠制藥有限公司
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;C07K14/59
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅;曹津燕

技術領域

本發明涉及一種促性腺激素的純化方法，特別是涉及一種從絕經婦女 的尿液中提取的促性腺激素的純化方法。

背景技術

促性腺激素(gonadotropin，gonadotropic?hormone)是指能夠促進雌 雄兩種性腺的發育，增加性激素分泌的一類激素，如腦垂體前葉分泌的黃 體生成激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)，人胎盤絨毛膜分泌的絨毛膜促 性腺激素(HCG)。其中，FSH和LH的主要作用是促進卵巢或睪丸生成 和分泌甾體性激素，它們與HCG合用，可治療性腺激素分泌不足所致的 原發性或繼發性閉經，無排卵性稀發月經所致的不孕癥等。絕經期婦女由 于雌性激素和孕激素缺乏，從而反饋調節垂體，分泌大量FSH和LH，由 尿中排出。因此，目前以FSH和LH為主要成分的促性腺激素生產方法多 以絕經期婦女的尿液作為原料，經過高嶺土吸附、酒精抽提得到＞3iu/mg 的尿促性腺激素粗品。國內目前常用的純化方法收率偏低(一般小于 50％)，成品效價在100iu/mg左右。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從絕經婦女的尿液中提取的促性腺激素 的純化方法。與已有的促性腺激素的提取分離方法相比，本發明的純化方 法獲得的以FSH和LH為主要成分的促性腺激素產品具有更高的效價(效 價＞150iu/mg)，收率也更高(＞75％)。

本發明提出的從絕經婦女的尿液中提取的促性腺激素的純化方法，包 括以下步驟：

(1)將尿促性腺激素粗品以溶液A溶解后加入硅酸鋁粉末進行吸附， 離心得沉淀以溶液A洗滌；再以溶液B洗脫沉淀，洗脫液過濾后加入乙醇 進行沉淀，干燥沉淀得中間體I；

(2)將中間體I以溶液C溶解，將得到的溶液經陰離子交換樹脂進 行層析，以溶液D洗脫，洗脫液中加入乙醇進行沉淀，干燥沉淀得中間體 II；

(3)將中間體II以溶液B溶解，先后加入溶液E和溶液F除熱原， 再加入乙醇進行沉淀，干燥沉淀，分裝得成品。

其中，所述溶液A可以為0.05-0.08mol/L醋酸鈉緩沖液，以冰醋酸調 節pH至4.5-5.5；溶液B可以為含有8-12重量％乙酸銨的20-60體積％乙 醇水溶液；溶液C可以為0.05-0.07mol/L的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽 (Tris-HCl)緩沖液，以鹽酸調節pH至6-8；溶液D可以為0.2-0.3mol/L 的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)緩沖液，以鹽酸調節pH至6-8； 溶液E可以為0.1-0.3mol/L磷酸鈉溶液；溶液F可以為0.2-0.4mol/L的醋 酸鈣溶液。

例如，在本發明的一種優選的實施方式中，所述溶液A為0.05mol/L 醋酸鈉緩沖液，以冰醋酸調節pH至5.0；溶液B為含有10％乙酸銨的40％ 乙醇溶液；溶液C為0.05mol/L的Tris-HCl緩沖液，以2mol/L鹽酸調節 pH至7.0；溶液D為0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液，以2mol/L鹽酸調節pH 至7.0；溶液E為0.2mol/L磷酸鈉溶液；溶液F為0.3mol/L的醋酸鈣溶液。

下面，對步驟(1)中的操作進行詳細的說明：所述洗脫液的過濾方 式可以為各種常規的過濾方式，優選采用抽濾，進一步優選先抽濾后再用 1萬分子量的膜超濾；所述沉淀用乙醇可以為濃度為75-100體積％的乙醇， 優選使用95體積％的藥用級乙醇；優選情況下，為了節約干燥時間，可以 在沉淀干燥前用先無水乙醇進行脫水；干燥操作優選采用真空干燥，進一 步優選采用在五氧化二磷存在條件下的真空干燥。

下面對步驟(2)中的操作進行詳細的說明：所述陰離子交換樹脂優 選為DE-23陰離子交換樹脂和/或DEAE陰離子交換樹脂；優選情況下， 在層析時先用溶液C洗滌完畢后再用溶液D進行洗脫；所述沉淀用乙醇可 以為濃度為75-100體積％的乙醇，優選使用95體積％的藥用級乙醇；優 選情況下，為了節約干燥時間，可以在沉淀干燥前用先無水乙醇進行脫水； 干燥操作優選采用真空干燥，進一步優選在五氧化二磷存在條件下的真空 干燥。