[發(fā)明專利]抗腫瘤溶栓雙效嵌合蛋白及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010130043.3
• 申請日: 2010-03-23
• 公開（公告）號: CN101805408A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡風(fēng)慶;戴有金;胡靜
• 申請（專利權(quán)）人: 遼寧大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/085;A61P35/00;A61P7/02;A61K38/45
• 代理公司: 沈陽杰克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗腫瘤溶栓雙效嵌合蛋白及其制備方法和應(yīng)用，屬于微生 物學(xué)，分子生物學(xué)和基因工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)

2009年，美國ASCO主席在介紹腫瘤進展時提到，癌癥的第一死亡 原因是癌癥本身和癌癥復(fù)發(fā)，第二位死因就是血栓。癌癥與血栓的關(guān)系非 常密切，重視癌癥血栓的預(yù)防和治療已成為臨床醫(yī)生今后工作的重點之 一。

1865年，法國醫(yī)生Armand?Trousseau首次報道了胃癌患者容易形成靜 脈血栓，不久，Billroth又于1878年發(fā)現(xiàn)了血栓中存在癌細(xì)胞，進一步提出 癌變可引起凝血功能紊亂。臨床上把腫瘤相關(guān)性血栓稱為Trousseau綜合 癥。大量的病理、實驗和臨床研究證實了這一現(xiàn)象，而且還發(fā)現(xiàn)，幾乎所 有的癌癥患者都存在局部或全部高凝狀態(tài)。

癌癥患者的血栓性疾病包括深靜脈血栓(deep?venous?thlmmbosis， DVT)、肺栓塞(pulmonary?embolism，PE)、彌散性血管內(nèi)凝血(disseminated intravascular?coagulation，DIC)、門靜脈血栓(portal?vein?thmrnbosis，PVT) 和動脈血栓栓塞(arterial?thromboembolism，AT)、游走性淺表血栓性靜脈 炎(migratory?thrombophlebitis?superficial)等，其中下肢DVT最為常見。

癌癥患者血栓形成的發(fā)病機理相當(dāng)復(fù)雜，至今尚未完全明確。多種因 素通過不同途徑共同導(dǎo)致了癌癥患者的血栓易患傾向，主要包括抗癌治 療、腫瘤細(xì)胞的表達物及釋放物和致癌基因等因素。

抗癌治療導(dǎo)致血栓形成，主要是手術(shù)治療期間形成血栓，化療藥物和 放射治療誘發(fā)血栓形成以及患者在接受中心靜脈穿刺置管治療期間，管周 纖維蛋白鞘導(dǎo)致血栓形成。

癌癥患者所患的血栓性疾病與腫瘤細(xì)胞表達和釋放的物質(zhì)關(guān)系密切。 腫瘤細(xì)胞可通過釋放促凝因子或炎性因子來直接或間接地激活凝血級聯(lián) 反應(yīng)，另一方面，炎性因子亦可刺激腫瘤細(xì)胞釋放更多的促凝因子而加劇 血液的高凝狀態(tài)。腫瘤細(xì)胞表達和釋放的三種主要促凝物質(zhì)為：組織因子 (TF)、癌促凝物質(zhì)(cancer?procoagulant?CP)和絲氨酸蛋白酶(hepsin)。

新近的研究表明，某些致癌基因在促進細(xì)胞惡變的同時也能夠引起凝 血功能紊亂。如Yu?J等證實，導(dǎo)致癌癥產(chǎn)生的某些基因病變?nèi)鏡as基因活 化或p53基因失活能夠造成組織因子(TF)的過度表達，誘發(fā)凝血病變。

最近的研究還顯示，血栓形成參與了腫瘤的進展、血管生成和轉(zhuǎn)移等 機制。除了癌癥治療形成血栓可視為外界因素外，其余兩種因素所形成的 血栓都是應(yīng)機體癌變出現(xiàn)的。研究發(fā)現(xiàn)，血栓的形成有利于腫瘤發(fā)生和發(fā) 展的機制可能是纖維蛋白沉積于腫瘤細(xì)胞周圍為腫瘤生長提供了2個便利 條件：一方面為腫瘤細(xì)胞附著提供了基質(zhì)，利于其局部擴散和蔓延；另一 方面，纖維蛋白凝血塊和相關(guān)的凝血因子能夠上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 的表達(VEGF)，從而為新生血管創(chuàng)造了條件。

金黃色葡萄球菌腸毒素C2(staphylococcal?enterotoxins，SEC2)是一類 細(xì)菌超抗原，它們無需抗原遞呈細(xì)胞(antigen?presenting?cells，APCs)的加 工，也不受組織相容性復(fù)合體(MHC)的限制，在APC之外與T細(xì)胞受體 Vβ鏈形成MHCII-SE-TCRVβ復(fù)合物，在極低濃度時就能刺激大部分有 TCRVβ序列的T細(xì)胞增殖，使之釋放多種細(xì)胞因子，產(chǎn)生極強的免疫應(yīng) 答效應(yīng)。SEC2可對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生超抗原依賴的細(xì)胞毒作用(Sag-dependent cell-mediated?T-cell-derived?cytotoxicity，SDCC)，從而產(chǎn)生系統(tǒng)的抗腫瘤反 應(yīng)。

葡激酶(staphylokinase，SAK)是由具有溶原性的金黃色葡萄球菌在指 數(shù)期后期產(chǎn)生、分泌的一種胞外蛋白。葡激酶的溶栓作用機制是激活體內(nèi) 溶栓系統(tǒng)，即通過激活纖溶酶原(Plg)轉(zhuǎn)變成纖溶酶(Pli)，而起到溶解血栓 的作用，是典型的第三代溶栓藥物，同其它的溶栓藥物比較，葡激酶具有 溶栓活力強，溶栓作用專一，免疫原性低以及過敏反應(yīng)少等多種特點，而 且當(dāng)血栓被溶解后，葡激酶的對纖溶酶原的激活作用會受到人體內(nèi)α2抗 纖溶酶的抑制，避免了出血反應(yīng)。