[發明專利]檢測殘留的氯霉素的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201010128316.0
• 申請日: 2010-03-17
• 公開（公告）號: CN101788560A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 北京阿匹斯生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

技術領域

本發明涉及一種檢測檢測殘留的氯霉素的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法， 屬于酶聯免疫(ELISA)和獸藥殘留檢測技術領域。更具體地，本發明涉及用 于檢測動物源食品、血液及尿液中殘留的氯霉素(CAP)的含量的酶聯免疫試 劑盒以及使用該試劑盒的檢測方法。

背景技術

氯霉素(chloramphenicol，CAP)是第一個人工合成的廣譜抗生素，因其 具有很好的抗菌效果，價格低廉，曾廣泛應用于畜牧業生產，成為畜禽疾病防 治的重要藥物。但近年來，人們逐漸認識到氯霉素能引起人的再生障礙性貧血、 粒狀白細胞缺少癥以及新生兒、早產兒灰色中合癥等，對人類健康構成巨大的 潛在威脅。因此，歐盟、美國以及我國等許多國家已相繼禁止氯霉素用于動物 源食品，并明確規定氯霉素殘留限量為不得檢出。

現在國內外的氯霉素檢測技術主要有微生物法、氣相色譜法(GC)、液 相色譜法(HPLC)、質譜分析等。微生物法靈敏度偏低；儀器分析方法設備 昂貴，且樣品前處理要求高。而酶聯免疫吸附法(ELISA)特異性強、靈敏度 高，樣品前處理簡單，檢測時間短、適合大量樣本的初步篩查。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種用于檢測動物源食品、血液及尿液 中殘留的氯霉素(CAP)的含量的酶聯免疫試劑盒。進一步地，本發明提供一 種高效、準確、快速且操作簡單地檢測動物源食品、血液及尿液中殘留的氯霉 素(CAP)的含量的方法。

為了解決上述技術問題，本發明的發明人通過深入研究和大量實驗，提供 以下技術方案：

1.一種檢測殘留的氯霉素的酶聯免疫試劑盒，包括微孔板(1)、氯霉素 標準樣品(2)、濃縮洗滌液(3)、濃縮酶標氯霉素(4)、酶標稀釋液(5)、底 物液(6)和終止液(7)，

其中所述微孔板(1)是包被有兔抗氯霉素IgG的微孔板，即用0.05mol/L 的pH值為9.6的Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液將兔抗氯霉素IgG稀釋至0.1μg/mL， 按每孔100μL的量添加到所述微孔板中，在4℃下放置過夜，棄去包被液， 用洗滌液洗板3次，真空抽干，將該微孔板密封后置-20℃下保存；

所述濃縮酶標氯霉素(4)是10～100倍濃縮酶標氯霉素，其用碳二亞胺法將 琥珀酸鈉氯霉素(CAP)連接到卵清白蛋白(OVA)上制備CAP-OVA，然后 用高碘酸鈉法將辣根過氧化物酶(HRP)標記到CAP-OVA上制備成CAP酶 標物(CAP-OVA-HRP)，用酶聯免疫吸附試驗測定CAP-OVA-HRP原液的工 作濃度，將CAP-OVA-HRP原液用含10％小牛血清(體積比)的PBS稀釋至 工作濃度(濃度在0.1μg/mL～1μg/mL之間)的10～100倍，該酶標CAP溶 液即為10～100倍濃縮酶標氯霉素。

2.根據上述第1項所述的檢測殘留的氯霉素的酶聯免疫試劑盒，其中所 述氯霉素標準品(2)的濃度分別為0μg/kg、0.03μg/kg、0.09μg/kg、0.27μg/kg、 0.81μg/kg和2.43μg/kg。

3.根據上述1項所述的檢測殘留的氯霉素的酶聯免疫試劑盒，其中所述 濃縮洗滌液(3)是5～10倍濃縮洗滌液；

所述酶標稀釋液(5)由小牛血清和洗滌液按體積比1∶9組成；

所述底物液(6)包含5.37g/L的一水檸檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)、19.38g/L的 Na₂HPO₄·12H₂O、50mg/L的3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)、25mg/L的過氧 化氫脲和5％(體積比)的N，N-二甲基甲酰胺；

所述終止液(7)是0.5mol/L的鹽酸。

4.根據上述第3項所述的檢測殘留的氯霉素的酶聯免疫試劑盒，其中， 所述濃縮洗滌液(3)是10倍濃縮洗滌液，其包含80g/L的NaCl、2g/L的KCl、 29g/L的Na₂HPO₄.12H₂O、2g/L的KH₂PO₄和5ml/L的吐溫-20；所述濃縮酶 標氯霉素(4)是20倍濃縮酶標氯霉素。