[發(fā)明專(zhuān)利]遺傳性玻璃體淀粉樣變性致病基因的檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010126966.1
• 申請(qǐng)日: 2010-03-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101775442A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周建獎(jiǎng);謝淵;趙艷;王鮮;李芳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 貴陽(yáng)中工知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 52106
• 代理人: 劉安寧

1.遺傳性玻璃體淀粉樣變性致病基因的檢測(cè)方法，其特征包括以下步驟：

(1)DNA的提取：由外周血有核細(xì)胞中提取基因組DNA；

(2)轉(zhuǎn)甲蛋白即TTR基因聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增：查詢TTR基因全序列，應(yīng)用primer?premier?5.0軟件設(shè)計(jì)擴(kuò)增TTR基因4個(gè)外顯子的引物，并合成，得出引物序列；

(3)電泳檢測(cè)：將擴(kuò)增產(chǎn)物與溴酚藍(lán)以5∶1混合，2％含溴化乙錠的瓊脂糖凝膠電泳后，用紫外分析儀觀察并拍照記錄結(jié)果；

(4)測(cè)序及結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序引物即為擴(kuò)增引物；

(5)致病基因鑒定：選擇無(wú)關(guān)個(gè)體作為對(duì)照，PCR擴(kuò)增轉(zhuǎn)甲蛋白即TTR基因第3外顯子并進(jìn)行測(cè)序，即可鑒定出致病基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于方法的(1)中，所述提取DNA的方法是酚/氯仿抽提法。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述方法的(2)中，所述查詢轉(zhuǎn)甲蛋白基因全序列是通過(guò)美國(guó)國(guó)立生物信息中心進(jìn)行的；所述引物序列列入TTR基因擴(kuò)增引物序列表。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述方法的(3)中，所述電泳是在200V下進(jìn)行30min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述方法的(4)中，所述測(cè)序是采用310型測(cè)序儀進(jìn)行的。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述方法的(5)中，所述無(wú)關(guān)個(gè)體選用150個(gè)。