[發明專利]一種快速培育純合抗蟲兼抗除草劑轉基因觀賞羽衣甘藍的方法

無效

• 申請號: 201010125939.2
• 申請日: 2010-03-16
• 公開（公告）號: CN101822156A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 劉凡;趙秀樞;張曉東;張月云
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01H4/00;A01N65/08;A01P13/00;A01P7/04;C05G3/00;C05G3/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種培育轉基因甘藍的方法，包括如下步驟：用含有目的基因的重組農桿菌侵染甘藍的子葉，再進行共培養，得到轉基因甘藍。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述甘藍的子葉為帶柄子葉；所述柄的長度為1mm-4mm；所述柄的長度具體為1mm、2mm或4mm。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述侵染包括如下步驟：將所述甘藍的子葉置于所述含有目的基因的重組農桿菌的菌液中，浸泡3min-5min，得到侵染后的子葉。

4.根據權利要求1、2或3所述的方法，其特征在于：所述含有目的基因的重組農桿菌的菌液的OD600值為0.3-0.5。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述共培養的方法包括如下步驟：將所述侵染后的子葉置于共培養培養基中，在溫度為22℃-27℃且黑暗的條件下培養2天；

所述共培養培養基由NH₄NO₃、KNO₃、CaCl₂·2H₂O、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄、FeSO₄·7H₂O、EDTA·Na₂、KI、CoCl₂·6H₂O、H₃BO₃、Na₂MoO₄·2H₂O、MnSO₄·4H₂O、CuSO₄·5H₂O、ZnSO₄·7H₂O、肌醇、煙酸、甘氨酸、硫胺素、鹽酸吡哆辛、6-芐氨基腺嘌呤、α-萘乙酸、蔗糖、瓊脂、乙酰丁香酮和水組成；

所述NH₄NO₃在所述共培養培養基中的濃度為1650mg/L，所述KNO₃在所述共培養培養基中的濃度為1900mg/L，所述CaCl₂·2H₂O在所述共培養培養基中的濃度為440mg/L，所述MgSO₄·7H₂O在所述共培養培養基中的濃度為370mg/L，所述KH₂PO₄在所述共培養培養基中的濃度為170mg/L，所述FeSO₄·7H₂O在所述共培養培養基中的濃度為27.8mg/L，所述EDTA·Na₂在所述共培養培養基中的濃度為37.3mg/L，所述KI在所述共培養培養基中的濃度為0.83mg/L，所述CoCl₂·6H₂O在所述共培養培養基中的濃度為0.025mg/L，所述H₃BO₃在所述共培養培養基中的濃度為6.2mg/L，所述Na₂MoO₄·2H₂O在所述共培養培養基中的濃度為0.25mg/L，所述MnSO₄·4H₂O在所述共培養培養基中的濃度為22.3mg/L，所述CuSO₄·5H₂O在所述共培養培養基中的濃度為0.025mg/L，所述ZnSO₄·7H₂O在所述共培養培養基中的濃度為8.6mg/L，所述肌醇在所述共培養培養基中的濃度為100mg/L，所述煙酸在所述共培養培養基中的濃度為5mg/L，所述甘氨酸在所述共培養培養基中的濃度為2.0mg/L，所述硫胺素在所述共培養培養基中的濃度為0.1mg/L，所述鹽酸吡哆辛在所述共培養培養基中的濃度為0.5mg/L，所述6-芐氨基腺嘌呤在所述共培養培養基中的濃度為1.0mg/L，所述α-萘乙酸在所述共培養培養基中的濃度為0.1mg/L，所述蔗糖在所述共培養培養基中的濃度為30g/L，所述瓊脂在所述共培養培養基中的濃度為1.0g/L，所述乙酰丁香酮在所述共培養培養基中的濃度為100μmol/L，所述共培養培養基的pH值為5.2。