[發(fā)明專利]一種磷酸鋁佐劑及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010123850.2
• 申請日: 2010-03-12
• 公開（公告）號: CN102188701A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張高峽;沈瓊;王蘭創(chuàng);刁美娟;郭慧麗
• 申請（專利權(quán)）人: 上海澤潤生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 上海天翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31224
• 代理人: 王裕

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種磷酸鋁佐劑及其制備方法。

背景技術(shù)

近年來，隨著免疫學(xué)研究的不斷深入及基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展，活載體疫苗、DNA疫苗和蛋白質(zhì)疫苗等新型疫苗的研究取得了可喜的進(jìn)步。這些新型疫苗純度高、特異性強，但免疫原性弱，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答不夠強，因此，應(yīng)用佐劑來增強其免疫原性或增強宿主對抗原的保護性應(yīng)答就顯得尤為重要。

隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，多肽疫苗及亞單位疫苗不斷涌現(xiàn)，無論在數(shù)量上還是質(zhì)量上對疫苗佐劑的要求都愈來愈高。人們在尋找新型佐劑的同時，對常規(guī)佐劑的改良研究也更加重視起來。雖已涌現(xiàn)不少新型佐劑，但大多尚處于實驗研究階段。所以目前在疫苗產(chǎn)業(yè)中鋁佐劑是最傳統(tǒng)最重要也是應(yīng)用最多的疫苗佐劑。

鋁佐劑的作用機理主要是在組織中形成抗原貯藏庫，產(chǎn)生顆粒性抗原來促進(jìn)抗原提呈給免疫細(xì)胞，使抗原滯留，緩慢釋放，從而吸引活性淋巴細(xì)胞，激活補體系統(tǒng)。

鋁鹽佐劑成本低、使用方便，是生物制品生產(chǎn)中應(yīng)用最廣的一種佐劑，也是最早被美國食品藥物監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)用于人類疫苗的佐劑。自1926年Glenny首先應(yīng)用鋁鹽黏附白喉類毒素至今已廣泛應(yīng)用于人獸疫苗。鋁佐劑通常在人用疫苗中含量為0.5mg/劑量，WHO推薦最高不超過1.25mg/劑量。

鋁佐劑包括氫氧化鋁佐劑和磷酸鋁佐劑。天然的氫氧化鋁有上百種存在形式，例如Al(OH)₃、Al₂O₃·H₂O、AlOOH等.而商品化的氫氧化鋁佐劑，實際上是Al(OH)₃的不完全脫水產(chǎn)物，即纖維狀結(jié)晶形態(tài)的偏氫氧化鋁AlO(OH)，氫氧化鋁佐劑(分子式為AlO(OH))的等電點為11.4，在生理條件(人體內(nèi))時帶正電荷，可較好地吸附帶負(fù)電荷的蛋白疫苗，如流感疫苗，乙肝疫苗等。而磷酸鋁佐劑的等電點依賴于磷酸根和羥基的比例，完全沒有磷酸根時(分子式Al(OH)₃)等電點為9.6，完全沒有羥基時(分子式AlPO₄)等電點為4.0，商業(yè)化的磷酸鋁佐劑的等電點一般為5.0，在生理條件時帶負(fù)電荷，可較好地吸附帶正電荷的蛋白疫苗，如HPV疫苗等。

中國專利CN2006800090340、CN2006800475728、CN2006800476098公開了磷酸鋁佐劑具有下列技術(shù)特征：粒徑0.5-20um；P/Al?0.3-1.2(優(yōu)選0.8-1.2)；等電點(PZC)4.0-7.0(優(yōu)選5.0-6.5，最優(yōu)5.7)；以沉淀法生產(chǎn)。

中國專利CN028149335公開了磷酸鋁佐劑具有下列技術(shù)特征：其為Al(OH)_x(PO4)_y，其中各陰離子化合價和乘以其摩爾分?jǐn)?shù)是-3，P/Al?0.3-0.99；以沉淀法生產(chǎn)。

但現(xiàn)有的磷酸鋁佐劑在均一性和包載能力方面缺陷，影響了此佐劑誘導(dǎo)產(chǎn)生的體液應(yīng)答水平。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種穩(wěn)定性高、均一性好和包載能力強的磷酸鋁佐劑及其制備方法，以應(yīng)用此佐劑可誘導(dǎo)產(chǎn)生較強的體液應(yīng)答水平，同時有利于在疫苗的生產(chǎn)過程中，可減少佐劑和疫苗的添加量，降低疫苗的毒副作用。

為此，本發(fā)明公開了一種磷酸鋁佐劑，其特征在于粒徑200-4500nm；多分散性系數(shù)0.01-1.0；等電點4.0-6.0。

在一實施例中，所述磷酸鋁佐劑，其特征在于粒徑200-800nm；多分散性系數(shù)(PDI)0.10-0.50；等電點(PZC)4.2-5.8；其中最優(yōu)選粒徑200～300nm；多分散性系數(shù)(PDI)0.15～0.35；等電點(PZC)4.5～5.5。

在一實施例中，所述磷酸鋁佐劑中鋁離子濃度為5620ug/ml，磷離子的濃度為5174ug/ml，P/Al比為0.92。

另一方面，本發(fā)明還公開了所述磷酸鋁佐劑的制備工藝，包括下列步驟：

a)采用蠕動泵將0.06mol/L氯化鋁與0.06mol/L磷酸二氫鈉的混合溶液和0.5mol/L強堿溶液分別以相應(yīng)的流速泵入反應(yīng)器中，攪拌，其中氯化鋁與磷酸二氫鈉溶液和強堿溶液的流速比為5∶2～15∶2；

b)收集混懸液，靜置，棄去上清夜，離心，得沉淀；

c)洗滌沉淀、溶解即得磷酸鋁佐劑溶液。