[發(fā)明專利]檢測含有篩選基因CaMV35S的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片及其應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010123701.6
• 申請日: 2010-03-15
• 公開（公告）號: CN101935694A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發(fā)明（設計）人: 路興波;武海斌;孫紅煒;韓偉;李凡
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發(fā)明涉及一種檢測含有篩選基因CaMV35S的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片及其應用，屬于生物芯片技術領域。

背景技術

近年來，玉米、大豆、棉花、油菜和番茄等轉(zhuǎn)基因作物已在很多國家獲得批準種植和生產(chǎn)，有的被加工成食品、飼料或用做食物添加劑。由于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的生態(tài)安全和食用安全一直備受爭議，40多個國家和地區(qū)相繼實施轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標識制度。

各國轉(zhuǎn)基因標識制度的相繼建立，對轉(zhuǎn)基因檢測技術的靈敏度和準確性提出了嚴格的要求，各種轉(zhuǎn)基因檢測技術也成為研究熱點。常用的轉(zhuǎn)基因檢測方法有聚合酶鏈式反應(PCR)法，外源蛋白檢測法，基因芯片檢測技術。雖然國外對轉(zhuǎn)基因作物檢測方法研究已有十幾年，但由于轉(zhuǎn)基因作物的種類多、數(shù)量大，一些轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品經(jīng)過深加工、各種條件處理與保存后，轉(zhuǎn)基因成分部分或完全降解，所以檢測難度大。因此，需要根據(jù)科學技術的發(fā)展不斷更新檢測方法。

但不容樂觀的是，設計PCR反應引物是一個棘手的問題，必須確保反應中兩條引物有相近的熔接溫度，引物之間不會發(fā)生相互作用，另外還要注意非特異性擴增，特別是當非特異性擴增帶與目的帶相近時，就會出現(xiàn)假陽性問題，從而干擾結(jié)果的判斷。隨著GMO檢測技術的發(fā)展情況及研究趨勢，基因芯片技術在此展示了更大的優(yōu)勢。基因芯片檢測原理是利用帶有熒光標記的樣品同探針特異雜交，從而產(chǎn)生陽性信號。因而非目的帶的擴增只要不產(chǎn)生陽性信號，就不會干擾，而且芯片檢測不依據(jù)電泳條帶。并且基因芯片可根據(jù)任何已知基因組序列設計特異性探針，以人工合成的方法快速制備芯片，且高度并行性、高通量、微型化、自動化、高準確度和靈敏度等優(yōu)點具有廣泛的應用前景。

經(jīng)對現(xiàn)有專利和其他文獻的檢索，尚未發(fā)現(xiàn)關于CaMV35S基因的基因芯片檢測技術的專利報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術的不足和實際檢測的需要，本發(fā)明提供了一種能夠特異性地檢測含篩選基因CaMV35S的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片及其應用。

本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：

一種檢測含篩選基因CaMV35S的轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品的基因芯片，包括表面醛基化修飾的載玻片和陣列涂布于其上的篩選基因CaMV35S探針以及核酸固定的陽性對照(HEX)、雜交陽性對照(PC)、陽性質(zhì)控探針(18S?rRNA)、陰性質(zhì)控探針、空白對照；

其中，所述陽性對照和雜交陽性對照均為北京博奧生物技術有限公司的產(chǎn)品，晶核酸固定陽性對照(HEX)產(chǎn)品號為：502000，晶雜交陽性對照(PC)產(chǎn)品號為：503000。

所述陽性質(zhì)控探針為18S?rRNA，其探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

ATGGTGGTGACGGGTGACGGAGAATTAGGGTTCGATTCCG；

所述陰性質(zhì)控探針為SHDC-人類表達特異蛋白基因，其探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

ATTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCC；

所述陽性質(zhì)控探針和陰性質(zhì)控探針序列均來源于許小丹，文思遠等(檢測及鑒定轉(zhuǎn)基因大豆寡核苷酸芯片的制備.農(nóng)業(yè)生物技術學報，2005，13(4)：429-434)的報道；

所述空白對照為點樣液為雙蒸水；

所述的篩選基因CaMV35S探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-CTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGA。

所述芯片的陣列布局為人為規(guī)定，可以任意布局，比如圖1所示的布局。

所述載玻片上還可以涂布有探針對照，探針對照包括轉(zhuǎn)基因玉米Bt176轉(zhuǎn)化體特異性探針、轉(zhuǎn)基因玉米Bt11轉(zhuǎn)化體特異性探針、轉(zhuǎn)基因玉米TC1507轉(zhuǎn)化體特異性探針、轉(zhuǎn)基因玉米Mon810轉(zhuǎn)化體特異性探針和轉(zhuǎn)基因玉米GA21轉(zhuǎn)化體特異性探針。

所述轉(zhuǎn)基因玉米Bt176轉(zhuǎn)化體特異性探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

TGCCCGTCACCGAGATCTGATGTTCTCTCCTCCATTGATG。

所述轉(zhuǎn)基因玉米Bt11轉(zhuǎn)化體特異性探針的序列為：