[發明專利]檢測含有篩選基因CaMV35S的轉基因植物及產品的基因芯片及其應用

無效

• 申請號: 201010123701.6
• 申請日: 2010-03-15
• 公開（公告）號: CN101935694A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 路興波;武海斌;孫紅煒;韓偉;李凡
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

1.一種檢測含篩選基因CaMV35S的轉基因植物及產品的基因芯片，其特征在于：包括表面醛基化修飾的載玻片和陣列涂布于其上的篩選基因CaMV35S探針以及核酸固定的陽性對照、雜交陽性對照、陽性質控探針、陰性質控探針、空白對照；

其中，所述陽性質控探針為18S?rRNA，其探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

ATGGTGGTGACGGGTGACGGAGAATTAGGGTTCGATTCCG；

所述陰性質控探針為SHDC-人類表達特異蛋白基因，其探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

ATTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCC；

所述空白對照為點樣液為雙蒸水；

所述的篩選基因CaMV35S探針序列為：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-

CTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGA。

2.根據權利要求1所述的檢測含篩選基因CaMV35S的轉基因植物及產品的基因芯片，其特征在于：所述載玻片上還涂布有探針對照，探針對照包括轉基因玉米Bt176轉化體特異性探針、轉基因玉米Bt11轉化體特異性探針、轉基因玉米TC1507轉化體特異性探針、轉基因玉米Mon810轉化體特異性探針和轉基因玉米GA21轉化體特異性探針。

3.根據權利要求1或2所述的檢測含篩選基因CaMV35S的轉基因植物及產品的基因芯片，其特征在于：所述陽性對照、雜交陽性對照、陽性質控探針、陰性質控探針、空白對照、探針對照的點樣濃度均為25μmol/L；所述篩選基因CaMV35S特異性探針的點樣濃度為25μmol/L。

4.權利要求1所述的檢測含篩選基因CaMV35S的轉基因植物及產品的基因芯片在特異性檢測含篩選基因CaMV35S的轉基因植物及其產品中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述芯片應用的方法是：提取待測植物或待測產品的基因組DNA，然后在二重熒光PCR反應體系中擴增，然后取PCR產物，與雜交液混勻后，于PCR儀中95℃熱變性10min，冰浴驟冷后加樣于芯片上的點樣區，蓋玻片封片；42℃水浴雜交2h；雜交后，芯片分別在42℃的洗液I和洗液II中各清洗4min，500r/min離心甩干，用晶芯LuxScanTM?10K激光共聚焦掃描儀進行掃描，波長532nm；PMT為850∨，Power為90∨，產生分析精度為10μm的16位TIFF圖像；用LuxScan3.0軟件進行數據采集和圖像分析，分析掃描圖像的熒光強度值以確定待測植物是否含有篩選基因CaMV35S；所述雜交液包括：3×SSC，0.2％SDS，25％甲酰胺，5×Denhart’s，33nmol/L?PC雜交陽性對照樣品；

所述洗液I包括：2×SSC，0.1×SDS；

所述洗液II為0.2×SSC。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述熒光染料為Cy3-Amidite。