[發(fā)明專利]一種聯(lián)合診斷胃病或評(píng)價(jià)胃癌風(fēng)險(xiǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010122781.3
• 申請(qǐng)日: 2010-03-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102087279A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金鑫;王瑞環(huán)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京美康生物技術(shù)研究中心
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N30/06;G01N33/577;C12N5/20;C07K16/40
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費(fèi)碧華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種診斷疾病的試劑盒，尤其涉及一種通過(guò)測(cè)定受試者胃蛋白酶原I及胃蛋白酶原II的濃度并與設(shè)定的cut-off值比較來(lái)診斷胃病或早期胃癌的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，本發(fā)明還涉及該試劑盒的制備方法，屬于胃病或早期胃癌的診斷或檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

胃蛋白酶原(PG)是一種門冬氨酸蛋白酶前體，是分子質(zhì)量為42kDa的單鏈多肽，包括3個(gè)二巰鍵，等電點(diǎn)為3.7。人類PG依其電泳遷移率可以分為7個(gè)組分，較快移向陽(yáng)性的1-5組分的免疫原性近似，稱為胃蛋白酶原I(PGI)，主要由胃腺的主細(xì)胞和黏液頸細(xì)胞分泌；組分6-7被稱為胃蛋白酶原II(PGII)，除由胃體和胃底黏膜的泌酸腺的主細(xì)胞分泌外，泌酸腺的黏液頸細(xì)胞、賁門腺和胃竇的幽門腺的黏液細(xì)胞以及十二指腸上段的Brunner腺也能產(chǎn)生PGII。胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II的基因位點(diǎn)、免疫反應(yīng)性及生化特性上均存在一定差異。不同種的PG的產(chǎn)生似乎與以下幾種因素相關(guān)：結(jié)構(gòu)基因的數(shù)量、個(gè)體等位基因的差異以及翻譯后的修飾。胃蛋白酶原無(wú)活性，在胃內(nèi)鹽酸作用下，或在酸性條件下，通過(guò)自身催化，從N端水解42個(gè)氨基酸殘基后而轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘奈傅鞍酌?。胃蛋白酶為?nèi)切酶，可分解大部分蛋白質(zhì)為標(biāo)和胨，產(chǎn)生的多肽或氨基酸較少。在PG轉(zhuǎn)變成胃蛋白酶的過(guò)程中，分子量由42kDa降為35kDa，等電點(diǎn)由3.7降為-1，主細(xì)胞中的PG貯存在細(xì)胞頂部的分泌顆粒中，當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)，通過(guò)胞吐作用大部分釋入腺腔，只有1％進(jìn)入血液循環(huán)。在正常人血清中的PGI濃度是PGII的6倍。由于胃幾乎是PG的唯一來(lái)源，并且在分泌階段的分泌量會(huì)發(fā)生變化，因此，血清PGI和PGII不僅反映了胃黏膜腺體和細(xì)胞的數(shù)量，也間接反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。胃酸分泌過(guò)多的淺表性胃炎和H?pylori感染的胃炎，PGI和PGII的分泌會(huì)增加；而在慢性嚴(yán)重萎縮性胃炎，當(dāng)主細(xì)胞減少時(shí)PGI含量下降；當(dāng)萎縮性胃炎伴有腸化、胃竇腺假幽門腺化生，PGII含量會(huì)隨之增高。當(dāng)腸上皮化生(intestinal?metaplasia，IM)、不典型增生時(shí)，PGI分泌會(huì)減少，PGI/PGII也會(huì)發(fā)生變化，因此，血清PG可作為監(jiān)測(cè)胃粘膜變化的一個(gè)可靠的標(biāo)志物。高濃度的PGI還作為十二指腸潰瘍及其并發(fā)癥的危險(xiǎn)性的一個(gè)亞臨床指征，也可以作為觀察H?pylori感染根除治療療效的一個(gè)指標(biāo)。

胃粘膜萎縮和腸上皮化生(特別是不完全型結(jié)腸化生)及異型增生是胃癌的癌前病變，對(duì)CAG患者尤其是伴有腸化和異型增生者進(jìn)行病情監(jiān)測(cè)，對(duì)于早期胃癌的發(fā)現(xiàn)意義重大。日本和中國(guó)胃癌患者的總數(shù)幾乎占到全球胃癌患者總數(shù)的一半。胃癌的篩查工作始于60年代胃癌高發(fā)的日本，當(dāng)時(shí)采用胃腸雙重對(duì)比造影—胃鏡—病理檢查階梯式的篩查方法，人力物力花費(fèi)較大。自1991年開(kāi)始，日本先后以血清PGI＜50ng/ml并PGI/GPII比值＜3.0和PGI＜70ng/ml并PGI/PGII比值＜3.0作為胃癌篩查的初篩指標(biāo)，歷經(jīng)5年共檢測(cè)血清樣本25415例，檢出胃癌43例(0.17％)，其中早癌32例(74％)。另以血清GPI＜70ng/ml并GPI/GPII比值＜3.0為胃癌篩檢的Cut-off值，其靈敏度84.6％，特異度73.5％，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值0.81％，陰性預(yù)測(cè)值99.9％。繼后十年中已有13萬(wàn)余人接受了血清PG法胃癌篩查，檢出胃癌患者123人，檢出率0.13％。

中國(guó)專家組于1997-1999年在中國(guó)胃癌高發(fā)區(qū)采用兩輪篩選法進(jìn)行胃癌篩查，以胃鏡病理組織學(xué)診斷為標(biāo)準(zhǔn)比較評(píng)價(jià)了兩種初篩方法：鋇劑-X線雙對(duì)比照影和血清胃蛋白酶原I/II含量檢測(cè)。結(jié)果顯示，在接受血清胃蛋白酶原I/II(PGI/PGII)檢測(cè)的1750人中，分別以PGI≤50+PGI/PGII≤3和PGI≤70+PGI/GPII比值≤3為初篩Cut-off值，后者篩出應(yīng)胃鏡精查者近400人，符合胃癌診斷者17例，檢測(cè)敏感度約為53％。特異度達(dá)到78％，第二輪胃鏡精查在這組人群中檢出胃癌32例。據(jù)此，血清胃蛋白酶原I/II(PGI/PGII)含量檢測(cè)優(yōu)于雙對(duì)比照影，血清PGI含量和PGI/GPII值相結(jié)合更適合于作為中國(guó)人胃癌初篩和胃部重大疾病普查標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是提供一種敏感度高、特異性強(qiáng)和準(zhǔn)確性好的診斷胃病或早期胃癌的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒；

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述酶聯(lián)免疫吸附試劑盒的方法；

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：