[發(fā)明專利]一種采用間接ELISA方法檢測(cè)鵝圓環(huán)病毒抗體的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010122698.6
• 申請(qǐng)日: 2010-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN101776687A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余旭平;胡東建;趙秀玲;郭婧;于洪濤;劉曉寧;孫紅霞;俞永裕;陳維虎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

1.一種采用間接ELISA方法檢測(cè)鵝圓環(huán)病毒抗體的快診板，其 特征在于，將包被好抗原的酶標(biāo)板用封閉液封閉后洗滌吸干水分，密 封后得；所述包被抗原的濃度為2.05μg/mL；所述封閉液為5%脫脂 奶；所述抗原為原核表達(dá)的鵝圓環(huán)病毒重組核衣殼蛋白，其制備方法 如下：

將含陽(yáng)性重組表達(dá)質(zhì)粒的工程菌接種于10mL含50ug/mL卡那霉 素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜，按1％的量轉(zhuǎn)接10mL含 50ug/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)，待OD600值達(dá) 0.6左右，加IPTG至終濃度為1mM，誘導(dǎo)4h；

離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎后離心收集包涵體，以含4M尿素、 1%Triton100的緩沖液對(duì)包涵體進(jìn)行洗滌，重復(fù)兩次，最后用8M的 尿素溶解包涵體，離心后取上清，用鎳瓊脂糖凝膠柱進(jìn)行進(jìn)一步純化， 用咪唑洗脫；

將洗脫液裝入已處理好的透析袋內(nèi)，置于復(fù)性緩沖液中，在4℃ 下進(jìn)行梯度透析，復(fù)性緩沖液中尿素濃度依次遞減，分別為4mol/L、 2mol/L、1mol/L、0.5mol/L和0mol/L，蛋白復(fù)性換液間隔時(shí)間為 10h‐12h。