[發(fā)明專利]一種同時測定正品大黃中13個化學(xué)成分含量的HPLC方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010120856.4
• 申請日: 2010-03-10
• 公開（公告）號: CN102192958A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許旭東;陳士林;南海江;許娜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種HPLC-DAD法同時測定大黃中13個化學(xué)成分含量的方法，可同時對三種正品大黃中的13個化學(xué)成分進(jìn)行定量測定的HPLC-DAD方法。

背景技術(shù)

大黃是我國著名的特產(chǎn)藥材，藥用歷史悠久。大黃味苦，性寒，歸胃、大腸、脾、肝經(jīng)，具攻下導(dǎo)滯、瀉火解毒、祛瘀止血等作用?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》載“其主下淤血、血閉、寒熱、破癥瘕積聚、留飲宿食、蕩滌腸胃、推陳致新、通利水谷、調(diào)中化食、安合五臟”。2005版中國藥典收載的正品大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根及根莖。掌葉大黃和唐古特大黃主要分布于青海、甘肅、四川等地，二者商品均稱“西大黃”、“北大黃”；藥用大黃主產(chǎn)于四川、貴州、湖北等地，商品稱“南大黃”、“川大黃”。臨床和藥理學(xué)研究表明：大黃中蒽醌類成分有抗菌、抗病毒、抗腫瘤的作用；蒽酮類成分主要有瀉下的作用；二苯乙烯苷類成分主要有擴(kuò)張毛細(xì)血管、降血壓、抗氧化的作用；鞣質(zhì)類成分主要有止血、抗氧化、抗病毒、促進(jìn)氮代謝、改善腎功能、治療精神病的作用；苯丁酮類成分主要有抗炎鎮(zhèn)痛的作用。因此，大黃中多種活性成分的定量分析對于大黃藥材的質(zhì)量評價具有十分重要的意義。文獻(xiàn)[91]報道中對大黃中化學(xué)成分的分析多采用少數(shù)幾個指標(biāo)成分的含量測定。本發(fā)明建立了一個對大黃中13個主要活性成分同時進(jìn)行含量測定的簡單準(zhǔn)確的方法，并應(yīng)用該方法分別分析了這13中活性成分在唐古特大黃(15批次)、掌葉大黃(18批次)及藥用大黃(13批次)中的含量，進(jìn)而比較不同基源正品大黃在化學(xué)成分組成和含量上的異同，為臨床上大黃的應(yīng)用提供更好的理論指導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中只能測定大黃中少數(shù)幾個指標(biāo)成分的含量的缺陷，提供一種簡單、快速、準(zhǔn)確的HPLC-DAD方法，該方法旨在建立同時測定大黃中13個化合物的含量，進(jìn)而比較不同基源正品大黃在化學(xué)成分組成和含量上的異同，為臨床上大黃的應(yīng)用提供更好的理論指導(dǎo)。本方法操作簡單，結(jié)果可靠靈敏，適用于大黃藥材的多指標(biāo)成分質(zhì)量控制。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種同時檢測大黃中13個化學(xué)成分的HPLC-DAD測定方法，包括樣品提取和液相分離兩個步驟，其特征在于對大黃中的被測成分的充分提取和13個化合物的良好分離，采用Zorbax EclipseXDB-C18色譜柱分離，以甲醇-0.05％磷酸水溶液為流動相作梯度洗脫。

(1).標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

分別稱取13個對照品適量，精密稱定，加甲醇制成CA(0.596mg/ml)，RG(0.611mg/ml)，ECG(0.360mg/ml)，RGG(0.368mg/ml)，LI(0.386mg/ml)，SB(0.350mg/ml)，HMG(0.607mg/ml)，SA(0.388mg/ml)，AE(0.329mg/ml)，RH(0.430mg/ml)，EM(0.290mg/ml)，CH(0.390mg/ml)，PH(0.320mg/ml)的混和對照品溶液作為儲備液，密封4℃保存。

(2).供試品溶液的制備

取干燥的大黃藥材粉末0.200g(60mesh)，精密稱定，置10ml茶色容量瓶中，加入10ml甲醇，室溫浸泡2h后超聲30min，重復(fù)3次，合并提取液并過濾，回收溶劑后用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至25ml茶色容量瓶，定容并搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過，HPLC分析。

(3).液相色譜分離

色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱(5μm，250mm×4.6mm，Agilent)

流動相：甲醇(A)-0.05％磷酸水溶液(B)，梯度洗脫，見Table 3-2

流速：1.0ml/min

檢測波長：280nm，232nm

柱溫：30℃

進(jìn)樣體積：10μl

Mobile-phase gradient

含量計算方法

13個被測化合物在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)呈良好的線性(r²＞0.9985)。日內(nèi)精密度和日間精密度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.15-0.90％和0.98-2.39％；該方法方法的回收率在96.41-103.87％范圍內(nèi)。色譜中13個化學(xué)成分的確認(rèn)通過與對照品的紫外圖譜和保留時間相比較來確認(rèn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法以峰面積計算大黃中13個化學(xué)成分的含量。

本發(fā)明的有益成果