[發明專利]一種以4.1R、CD29為靶點的抗腫瘤藥物篩選模型的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201010119587.X
• 申請日: 2010-03-09
• 公開（公告）號: CN101787357A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 康巧珍;安秀麗;周晴晴;汲振余;閻紅霞;陳鯉翔;王婷
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

技術領域

本發明屬于藥物領域，涉及一種抗腫瘤藥物篩選模型的制備，即制備C57BL/6J_4.1R-/-MEF細胞模型，以期作為以4.1R和CD29為靶標的新藥制備和基因治療的細胞篩選模型。?

背景技術

蛋白4.1(指紅細胞膜蛋白經SDS-PAGE后第4.1條顯色帶)是紅細胞中以血影蛋白(spectrin)為基礎的細胞膜骨架的一個基本成分^[1]，是將紅細胞跨膜蛋白和血影蛋白-肌動蛋白骨架網絡連接起來的橋梁，對維持紅細胞的形狀、粘附、脆性及正常生理功能發揮重要作用^[2]。人類蛋白4.1表達缺失會導致溶血性貧血?^[3]。因蛋白4.1最初是在成熟紅細胞中發現的，故命名為4.1R。最近幾年，又相繼發現了三種與4.1R有很高同源性的蛋白質，分別命名為4.1G(廣泛表達)，4.1N(主要在神經元中表達)，4.1B(主要在腦中表達)，這四種蛋白質的基因即構成了蛋白4.1基因家族。蛋白4.1家族成員都具有三個高度保守的功能性結構域：氨基端的膜結合結構域MBD(Membrane?binding?domain)、血影蛋白-肌動蛋白結合結構域SABD(Spectrin?actin?binding?domain)和參與細胞信號轉導的羧基末端結構域(C-terminal?domain)。其氨基末端膜結合結構域MBD在序列和空間折疊上都與ERM蛋白(Ezrin?radisin?moesin)氨基末端膜結合結構域具有同源性，被統稱為FERM結構域(four-point-one，ezrin，radixin，moesin?domain)，擁有FERM結構域的蛋白被稱為4.1蛋白超家族^[1]。已有報道表明ERM蛋白在T細胞活化中發揮重要作用^[4-5]，且Tang?TK等^[6-7]人也觀察到人T細胞中4.1R在微管組織中心(MTOS)高表達。?

最近有研究發現，4.1R的缺失會使小鼠CD4⁺T細胞大量活化增殖，即提出4.1R在T細胞活化中可能起著重要的調控作用^[8]。本專利建立的4.1R敲除小鼠胚胎成纖維細胞，可在體外研究4.1R對T細胞依賴性免疫應答的調控，為以4.1R為藥靶研究T細胞相關性疾病提供實驗材料。?

在國內，胃癌、結腸癌、食管癌和乳腺癌的發病率較高，且治愈較難，因此尋找有效的靶點制備抗癌藥物對緩解病情具有一定的臨床應用價值。有文獻報道，在腦膜瘤^[9]、室管膜瘤^[10]、非小細胞肺癌^[11]、食管小細胞癌^[12]、乳腺癌?^[13]和胃癌^[14]等多種癌癥中，蛋白4.1表達下降或表達缺失，并且越來越多的臨床和實驗證據證實編碼蛋白4.1的基因在多種腫瘤中表現出抑癌基因的作用?^[15]，這表明蛋白4.1與腫瘤的發生和發展有著密切的關系。高艷峰等報導4.1B在食管鱗狀細胞癌中表達異常^[16]。因此，以蛋白4.1作為藥靶進行抗腫瘤藥物的篩選具有一定的臨床意義和實用價值。?