[發明專利]一種痰液的檢測、分析方法及其用途

無效

• 申請號: 201010118942.1
• 申請日: 2010-03-05
• 公開（公告）號: CN102192976A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發明（設計）人: 董競成;曹玉雪;崔焱;杜懿杰
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;A61B10/02
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬生物醫學領域，涉及一種痰液的檢測、分析方法，具體涉及一種檢測分析痰液中細胞、細胞因子以及炎癥介質變化的方法。本方法有助于呼吸系統疾病支氣管哮喘的分型和中醫證型的微觀辨證。

背景技術

臨床醫學研究顯示，支氣管哮喘是由多種炎癥細胞、細胞因子和炎性介質等所促成的慢性氣道炎癥性疾病，屬于中醫學哮病的范疇。中醫學認為“伏痰”是哮病的宿根。其基本病理變化為伏痰遇感引觸，痰隨氣升，氣因痰阻，相互搏結，壅塞氣道，而致痰鳴如吼，氣息喘促。與現代醫學認為慢性氣道炎癥是哮喘的重要病理基礎一樣，中醫的痰在哮病的發病當中也占據著樞紐的位置。對于哮病發作期，中醫學認為素體陽虛，外感于寒，則發為冷哮；素體陽盛，外感于熱，則發為熱哮，主要以“寒痰、熱痰”等證型進行辨證治療。一般認為，中醫“熱痰證”與呼吸道細菌等病原體感染有著密切的關系。有研究發現熱哮血中性粒細胞往往明顯升高，寒哮嗜酸性粒細胞明顯升高，其反映了血中炎癥細胞的結果，但未見其對哮喘寒痰證和熱痰證氣道局部的炎癥指標進行分析。鑒于中醫“有形之痰”在哮病中的重要性，有關研究領域已在關注哮喘寒痰證和熱痰證患者痰和血中炎癥細胞的變化的關系。目前國內外尚無相關報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種痰液的檢測、分析方法及其用途，具體涉及一種檢測分析痰液中細胞、細胞因子以及炎癥介質變化的方法。本發明針對中醫哮喘寒痰證和熱痰證患者痰和血中炎癥細胞的變化的關系，提供一種利用誘導痰技術對痰液進行檢測、分析的方法。本方法有助于呼吸系統疾病支氣管哮喘的分型和中醫證型的微觀辨證。

具體而言，本方法采用誘導痰技術分析哮喘寒痰證和熱痰證患者痰和血中炎癥細胞的變化，并結合相關的炎癥因子及炎性介質的變化，提供用于支氣管哮喘中醫“寒痰、熱痰”微觀辨證的參考指標，并評價其可靠性。

具體而言，本方法采用誘導痰技術使哮喘寒痰證、熱痰證患者咳出深部痰液，對痰液進行細胞學分類計數以及檢測痰上清液和血清中IL-8、IL-5、ECP、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、LTB4、CRP等相關炎癥指標，提供用于支氣管哮喘中醫“寒痰、熱痰”微觀辨證的參考指標，并評價其可靠性。

本方法采用誘導痰技術使患者咳出深部痰液，分析痰液中炎性細胞、相關細胞因子的方法，并與血液中的相關指標進行比較，包括下述步驟：

1)誘導痰技術：

根據Pin等的改良方法，制定下述流程：

①測基礎第一秒用力呼氣量(FEV₁)；②吸入沙丁胺醇；③10min后再測FEV₁作為基礎值；④室溫下超聲霧化器吸入消毒的高滲鹽水；⑤間隔測FEV₁和連續監測脈搏血氧飽和度；⑥測得FEV₁降低值大于20％基礎值時，暫停霧化吸入試驗；⑦收集霧化吸入后第5、10、15、20min咳出深部的。

2)細胞學檢測：鏡下挑選上述痰液黏稠部分，稱重后加入0.1％二硫蘇糖醇(DTT)，置于37℃水浴箱，螺旋振蕩至均勻，離心，制作細胞涂片，染色，光鏡下計數400個以上非立方上皮細胞，分類計數，留取上清液，-70℃冰箱凍存。

3)根據哮喘發作期的中醫辨證分類證型，收集符合寒痰證、熱痰證的哮喘患者痰涂片染色，顯微鏡下進行細胞分類計數，檢測痰液和血液嗜酸性粒細胞、中性粒細胞百分比；血常規測定嗜酸性粒細胞和中性粒細胞百分比；用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)方法檢測痰上清液和血清白介素-8(IL-8)、IL-5、嗜酸性陽離子蛋白(ECP)、IL-4、IL-6、IL-10、干擾素-γ(IFN-γ)、白三烯B4(LTB4)、C反應蛋白(CRP)。

4)分析比較痰液中炎性細胞、相關細胞因子與血液中的相關指標，獲得用于支氣管哮喘中醫“寒痰、熱痰”微觀辨證的參考指標。

所述的參考指標包括痰上清液和血清中相關炎癥指標：嗜酸性粒細胞、嗜酸性陽離子蛋白、中性粒細胞、誘導痰EOS和嗜酸性陽離子蛋白、白三烯B4、TH2和/或C反應蛋白。

所述的參考指標可用作制定評價支氣管哮喘中醫“寒痰、熱痰證”微觀辨證指標。