[發(fā)明專利]細(xì)胞因子-超抗原融合蛋白在制備抗實體瘤藥物的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010118438.1
• 申請日: 2010-03-05
• 公開（公告）號: CN101829322A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫嘉琳
• 申請（專利權(quán)）人: 孫嘉琳
• 主分類號: A61K39/085
• 分類號: A61K39/085;A61K38/18;A61P35/00
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種融合蛋白的用途，特別是涉及一種細(xì)胞因子-超抗原融合蛋白在制備抗實體瘤藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)

表皮生長因子(Epidermal?growth?factor，EGF)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(Vascularendothelial?cell?growth?factor，VEGF)等的受體在各種腫瘤組織中大量表達(dá)，例如在腸黏膜腫瘤中的EGF受體比正常組織高出300倍(Gastroenterology，98，961-967，1990)。所以，異常高表達(dá)的EGF受體和VEGF成為一個引人注目的癌治療靶點(diǎn)。

表皮生長因子連接到一種毒素蛋白或RNA水解酶上可選擇性殺傷高表達(dá)EGF受體的癌細(xì)胞(Clin.Cancer?Res.，11，329-334，2005；Protein?Eng.，11，1285-1292，1998)，但這種方式不是依靠免疫系統(tǒng)例如淋巴細(xì)胞等攻擊腫瘤。

EGF基因在80年代早期被發(fā)現(xiàn)了(Nucleic?Acids?Res.，10，4467-4482，1982；Nature，303，722-725，1983)，它的成熟形式是53氨基酸的多肽。

VEGF基因是在80年代后期被發(fā)現(xiàn)(Science，246，1306-1309，1989；Science，246，1309-1312，1989)，由于mRNA的不同剪切，它的成熟形式有多種形式，長度可以是189、165以及121氨基酸的多肽(J.Biol.Chem.，266，11947-11954，1991)。

細(xì)胞受體是一種位于細(xì)胞表面的蛋白，接受外面信號后使得細(xì)胞內(nèi)發(fā)生一系列信號傳導(dǎo)并由此引發(fā)基因調(diào)控等活動，而癌細(xì)胞上常常有大量與生長因子有關(guān)的受體，這些受體就成為抗體的靶點(diǎn)。如果抗體抗這些受體即與它們相互作用也就是與它們結(jié)合，從而阻斷細(xì)胞因子與其受體的相互作用，從而達(dá)到抑制腫瘤生長。

抗體可中和封閉癌細(xì)胞上的受體，從而抑制配體介導(dǎo)的細(xì)胞增殖。雖然抗體有抗體依賴性細(xì)胞毒作用(antibody?dependent-cell?mediated?cytotoxicity)，但作用不顯著。通過連接一個金黃色葡萄球菌腸毒素A(Staphylococcal-enterotoxin?A，SEA)的超抗原(Superantigen)到抗體上可產(chǎn)生加強(qiáng)的淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒。

SEA基因早在80年代就報道了(J.Biol.Chem.，262，7006-7013，1987；J.Bacteriol.，170，34-41，1988)。為了減輕SEA的副作用，在它的第227位置上引入了一個點(diǎn)突變(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94，2489-2494，1997)。為了減弱血清反應(yīng)同時又保留SEA的生物活性，在SEA中引入更多的點(diǎn)突變(J.Mol.Biol.，333，893-905，2003)。

SEA不需要抗原提呈細(xì)胞的加工處理，而以完整的蛋白質(zhì)形式直接與細(xì)胞膜上的MHCII類分子結(jié)合形成復(fù)合物，識別T?cell?receptor(TCR)的Vβ片段，激活比普通抗原多得多的T細(xì)胞(包括CD4+，CD8+)，并釋放大量細(xì)胞因子，對靶細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)而有力的細(xì)胞毒作用。瑞典的一個小組的抗體超抗原融合蛋白對于B16黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移進(jìn)行了很多研究(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，9791-9795，1995；Eur.Surg.Res.，35，457-463，2003)，但對于抗實體瘤的作用如何仍然不清楚。

另外，要使抗體成為藥物，就必須對于鼠源抗體進(jìn)行人源化的基因工程改造。由于抗體藥物的使用劑量很大，常常需要數(shù)十毫克/人/次，這就要求提高基因工程抗體的動物細(xì)胞的表達(dá)水平以及發(fā)展大規(guī)模發(fā)酵技術(shù)。所以抗體藥物的研究開發(fā)的周期和投資成本是非常巨大的。

癌細(xì)胞是由正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變而來的，癌細(xì)胞的抗原是自身抗原，所以癌細(xì)胞能夠逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。人們一直在尋找新的抗癌方法來提高癌癥病人的免疫力，特別是針對癌細(xì)胞的特異性免疫力。因此，本領(lǐng)域迫切需要一種特別針對癌細(xì)胞的強(qiáng)有力的新的抗癌藥物用于抗腫瘤，特別是抗實體腫瘤。這種藥物是區(qū)別于抗體的，現(xiàn)在還沒有報道。

中國專利申請?zhí)?00310109829.7“一種可用以抗癌治療的超抗原融合蛋白質(zhì)及其生產(chǎn)方法”公開了一種構(gòu)建細(xì)胞因子和超抗原的融合蛋白的方法以及這種融合蛋白質(zhì)在大腸桿菌中表達(dá)和純化的方法，但并沒有公開細(xì)胞因子和超抗原的融合蛋白抗實體瘤的生物活性的數(shù)據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容