[發(fā)明專(zhuān)利]一種左亞葉酸鈉原料藥的檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010117294.8
• 申請(qǐng)日: 2010-03-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102192956A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 靳朝東;鄒美香;單淇;孫歆慧;周福軍;吳疆;薛津;李祎亮;侯文彬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津康鴻醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/50;G01N30/74
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種左亞葉酸鈉原料藥的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

左亞葉酸((6S)-5-甲酰-5，6，7，8-四氫葉酸)是一種葉酸衍生物，其基本作用和葉酸相同，具有刺激白細(xì)胞生長(zhǎng)成熟的作用，能改善各種原因引起的巨幼細(xì)胞性貧血。另外，還主要用于腫瘤化療，對(duì)抗腫瘤細(xì)胞對(duì)氨基蝶呤或甲氨蝶呤的抗藥性，或拮抗氨基蝶呤或甲氨蝶呤對(duì)正常細(xì)胞的毒性；也用作自身免疫疾病(如銀屑病和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的輔助用藥。左亞葉酸的效果優(yōu)于葉酸，因?yàn)槿~酸在肝及骨髓中先轉(zhuǎn)化為亞葉酸才能起作用。

左旋亞葉酸一般多以鈣鹽形式做成制劑，但其鈣鹽的水溶液穩(wěn)定性不好，容易產(chǎn)生沉淀，使用不便。左亞葉酸的鈉鹽(結(jié)構(gòu)如式I所示)溶解度較鈣鹽好，適于制備成高濃度制劑，同時(shí)與其他藥物制劑的相容性也好于鈣鹽，因此是比當(dāng)前廣泛應(yīng)用的亞葉酸鈣鹽更為可靠的劑型。

然而，由于左亞葉酸鈉在合成制備過(guò)程中有可能引入諸如原料、副反應(yīng)產(chǎn)物及其他有關(guān)物質(zhì)，因此，建立相應(yīng)的含量測(cè)定方法和有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，對(duì)控制亞葉酸鈉的質(zhì)量有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于為更有效地控制左亞葉酸鈉原料藥質(zhì)量而提供一種左亞葉酸鈉原料藥的檢測(cè)方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種左亞葉酸鈉原料藥的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括采用反相高效液相色譜法檢測(cè)左亞葉酸鈉原料藥中雜質(zhì)和左亞葉酸根的含量，其中反相高效液相色譜的條件包括：

采用以十八烷基或辛烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；

采用包含緩沖劑和四丁基氫氧化銨的pH值為7.0～7.8的、體積比為70∶30～95∶5的水與有機(jī)相的混合流動(dòng)相，其中有機(jī)相為甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇或正丙醇。

在上述檢測(cè)方法中，緩沖劑可以選自磷酸鹽，例如，磷酸氫二銨、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉，檸檬酸或其鹽，酒石酸或其鹽，硫酸鹽以及高氯酸鹽中的一種或多種；優(yōu)選為磷酸鹽，例如，磷酸氫二銨、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉中的一種或多種；更優(yōu)選為磷酸氫二鈉。

在上述檢測(cè)方法中，混合流動(dòng)相中緩沖劑的濃度可以為0.05～1.5％(重量/體積)，四丁基氫氧化銨的濃度為0.01～0.5％(體積/體積)。混合流動(dòng)相可以為體積比為70∶30～95∶5的水與甲醇的混合流動(dòng)相，優(yōu)選為體積比為75∶25的水與甲醇的混合流動(dòng)相；或者體積比為70∶30～95∶5的水與乙腈的混合流動(dòng)相，優(yōu)選為體積比為80∶20的水與乙腈的混合流動(dòng)相。更優(yōu)選地，混合流動(dòng)相為包含0.28％(重量/體積)磷酸氫二鈉和0.1％(體積/體積)四丁基氫氧化銨的體積比為75∶25、pH值為7.4的水與甲醇的混合流動(dòng)相。混合流動(dòng)相的pH值優(yōu)選采用磷酸調(diào)節(jié)。

在上述檢測(cè)方法中，反相高效液相色譜條件還包括柱溫為25～40，優(yōu)選為30℃；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。

上述檢測(cè)方法還可以包括采用已知含量左亞葉酸鈉作為對(duì)照品，以自身對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)的含量；和/或以外標(biāo)法計(jì)算左亞葉酸鈉原料藥中左亞葉酸根。

優(yōu)選地，上述檢測(cè)方法還包括采用高效液相色譜法檢測(cè)左亞葉酸鈉原料藥中左亞葉酸鈉右旋異構(gòu)體的含量，其中高效液相色譜條件包括：

采用Pirkle型、纖維素型、環(huán)糊精型、蛋白質(zhì)型或大環(huán)糖肽抗生素鍵合固定相為填充劑的色譜柱；

采用包含緩沖劑的pH值為5.0～7.0的、體積比為70∶30～97∶3的水與有機(jī)相的混合流動(dòng)相，其中有機(jī)相為甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇或正丙醇。

其中，緩沖劑也可以選自磷酸鹽，例如，磷酸氫二銨、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉，檸檬酸或其鹽，酒石酸或其鹽，硫酸鹽以及高氯酸鹽中的一種或多種；優(yōu)選為磷酸鹽，例如，磷酸氫二銨、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉中的一種或多種；更優(yōu)選為磷酸氫二鈉。

其中，混合流動(dòng)相中緩沖劑的濃度可以為0.01～1.0mol/L。混合流動(dòng)相可以為體積比為70∶30～97∶3的水與異丙醇的混合流動(dòng)相，優(yōu)選為體積比為90∶10的水與異丙醇的混合流動(dòng)相。更優(yōu)選地，混合流動(dòng)相為包含0.05mol/L磷酸氫二鈉的體積比為90∶10、pH值為5.5的水與異丙醇的混合流動(dòng)相。混合流動(dòng)相的pH值優(yōu)選采用磷酸調(diào)節(jié)。

其中，反相高效液相色譜條件還包括柱溫為25～40℃，優(yōu)選為30℃；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。