[發(fā)明專利]從黑木耳中分離制備β-葡聚糖的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010116234.4
• 申請日: 2010-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN101798358A
• 公開（公告）日: 2010-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜琪珍;宋廣磊
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工商大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/02
• 分類號(hào): C08B37/02
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 馮子玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，涉及黑木耳深加工技術(shù)，特別是從黑木耳中分離制備β-葡聚糖的方法。?

技術(shù)背景

黑木耳具有清肺、益氣補(bǔ)血等功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明黑木耳中的多糖具有增強(qiáng)人體免疫力，防癌抗癌和防止血栓的形成等功能。β-葡聚糖是多糖中的一種，其活性結(jié)構(gòu)是由葡萄糖單位組成的多聚糖，它們大多數(shù)通過β-1，3結(jié)合，這是葡萄糖鏈連接的方式。它能夠活化巨噬細(xì)胞、嗜中性白血球等，因此能提高白細(xì)胞素、細(xì)胞分裂素和特殊抗體的含量，全面刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)。因此β-葡聚糖具有重要的應(yīng)用價(jià)值。采用高速逆流色譜方法從黑木耳中分離制備β-葡聚糖高分子未見文獻(xiàn)報(bào)道。?

現(xiàn)有的關(guān)于β-葡聚糖的分離純化方法主要是采用凝膠色譜，其局限性是分離成本高，分離速度慢。其次，凝膠色譜回收率低，再生使用相對困難，難以發(fā)展成為制備量大的分離技術(shù)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種成本較低、效率高的從黑木耳中分離制備β-葡聚糖的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：采用熱水(100℃)浸提黑木耳中的多糖成分；用醇沉的方法對浸提得到提取物進(jìn)行初步純化，得到黑木耳多糖粗提物；以逆流色譜儀為分離設(shè)備分離純化黑木耳多糖粗提物中的β-葡聚糖，其溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處于固體的聚乙二醇1000、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和處于液體的水組成。先將聚乙二醇1000的溶液達(dá)到飽和，再通過添加磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉使聚乙二醇1000飽和溶液分層，磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉的用量重量比為1∶3～3∶1。上相做固定相，下相做流動(dòng)相。用截留分子量為20kDa的透析袋流水透析去除溶劑中的磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液，冷凍干燥即得β-葡聚糖粉末。操作步驟如下：?

(1)采用沸水浸提黑木耳干粉中的多糖，得到黑木耳多糖提取液；?

(2)將黑木耳多糖提取液真空濃縮至含固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)40％-50％；?

(3)在上述濃縮液中加入5-10倍體積的無水乙醇，得到醇沉多糖，將其真空濃縮干燥，得到固體黑木耳多糖提物；?

(4)采用逆流色譜方法分離純化黑木耳多糖提取物；?

(5)收集逆流色譜分離的β-葡聚糖組分，用截留分子量為20kDa的透析袋流水透析去除溶劑中的磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和聚乙二醇1000，得到β-葡聚糖水溶液；?

(6)將β-葡聚糖水溶液真空濃縮至固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到60％以上，再采用冷凍干燥，得到純化的β-葡聚糖粉末。?

步驟(1)所述的浸提過程是：采用沸水浸提溶劑與黑木耳干粉的液料體積比為5～10∶1，條件為溫度100℃，浸提時(shí)間2小時(shí)，浸提次數(shù)2～3次。?

步驟(2)和步驟(3)所述真空濃縮的真空度低于0.09Mpa，溫度為50～60℃。?

步驟(4)所述逆流色譜方法為：采用逆流色譜儀為分離設(shè)備，溶劑系統(tǒng)由常溫常壓下處于固體的聚乙二醇1000、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和處于液體的水組成；先用水溶解聚乙二醇1000，使溶液達(dá)到飽和，再添加磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉使聚乙二醇1000飽和溶液分層，磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉的使用重量比為1∶3～3∶1；上相做固定相，下相做流動(dòng)相；用泵將上述溶劑系統(tǒng)的上相注入逆流色譜儀的色譜柱，并取上述溶劑系統(tǒng)的部分上相溶解固體黑木耳多糖提物制備逆流色譜樣品溶液；開啟逆流色譜儀和流動(dòng)相輸液泵，將樣品溶液和流動(dòng)相輸入逆流色譜分離柱；部分收集器收集流出組分，用薄層層析的方法檢測各組分，并收集β-葡聚糖組分。?

步驟(4)所述逆流色譜方法所用的逆流色譜儀為高速逆流色譜儀HSCCC。?

步驟(6)所述冷凍干燥的真空度低于50Pa，溫度低于-35℃。?

附圖說明

圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。?

圖2為實(shí)施例1的HSCCC分離圖譜。Fraction?II：β-葡聚糖組分。?

圖3為實(shí)施例2的HSCCC分離圖譜。Fraction?II：β-葡聚糖組分。?

圖4為實(shí)施例3的HSCCC分離圖譜。Fraction?II：β-葡聚糖組分。?

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1?