[發明專利]一種微量核酸檢測方法

無效

• 申請號: 201010114725.5
• 申請日: 2010-02-26
• 公開（公告）號: CN102010893A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 萬俊松;周志圖;胡勝標
• 申請（專利權）人: 萬俊松
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種微量核酸檢測方法，其特征在于：該方法的步驟為：

(1)儀器安裝：首先將UltraPower可見光凝膠透射儀置于水平桌面；使用時，直接把變壓器電源插頭接變壓器插口，安裝完畢待用；

(2)試驗操作：將待測樣品準備好，同時準備已知濃度的標準品DNA，染料為自主研發的UltraPower核酸染料(即用型)，具體操作步驟：

A標準品的處理：標準品的濃度并不十分固定，可根據需要進行調整，一般核酸的終濃度在10-2000pg/μL的條件下，可以得到比較好的線性關系，將標準品用蒸餾水稀釋至濃度為：1600，800，400，200，100，50，25pg/L，同時以用于稀釋標準品核酸的蒸餾水做空白對照；

B在透明管內進行操作，如可以使用PCR管或八連管，將標準品和樣品與UltraPower核酸染料(即用型)等體積混勻(如5μL核酸溶液與5μLUltraPower^TM核酸染料(即用型)混勻)此時標準品核酸的終濃度為800，400，200，100，50，25，12.5，0pg/μL，在室溫下避光放置30min，使UltraPower^TM核酸染料與待測DNA充分反應，反應結束后將反應管放在透射儀的藍色顯色板上，將暗箱蓋好；

(3)DNA成像：

打開UltraPower可見光凝膠透射儀的電源，由于UltraPower核酸染料與待測DNA反應后會發出熒光，通過暗箱上方的顯色片就可以清楚的觀測到發光的DNA樣品，用數碼相機拍照；?

(4)DNA樣品濃度分析：拍照后，打開計算機，進入pgdetect程序，將上步中拍好的圖片導入pgdetect程序，點擊檢測按鈕進行DNA濃度分析；

pgdetect程序界面主要有以下幾個部分組成：

A添加控制點：首先點擊添加控制點，對標準品進行設定，鼠標點擊對應的標準品，在pgdetect的界面右上角的表格中的序號一列中會自動出現控制點序號即1，2，3，4，5等，雙擊序號在濃度一欄中輸入相應的濃度；

B刪除選中控制點：對控制點進行刪除，首先選中要刪除的控制點，點擊此按鈕即可，

C保存控制點信息：對控制點信息進行保存。點擊此按鈕，即可保存當前界面的控制點信息；

D讀取控制點信息：點擊此按鈕，即可利用已經保存的控制點信息，對當前的未知樣品進行定量檢測；

E計算當前點濃度：點擊此按鈕后，鼠標點擊樣品點處，在程序左下角即會出現未知樣品濃度值。

2.根據權利要求書1所述的一種微量核酸檢測方法，其特征在于：可以檢測的核酸堿基數大于十bp。

3.根據權利要求書1所述的一種微量核酸檢測方法，其特征在于：所用的檢測器為UltraPower可見光凝膠透射儀。

4.根據權利要求書1所述的一種微量核酸檢測方法，其特征在于：所述成像系統主要由發射光源、濾光片和暗箱三部分組成，其中光源由順序排列?的多個發光二極管構成，濾光片由塑料材質的亞克力板構成，所述暗箱是由特質材料制備的箱體和長波濾光片兩部分構成。

5.根據權利要求書1所述的一種微量核酸檢測方法，其特征在于：所用的檢測染料為的UltraPower核酸染料。

6.根據權利要求書1所述的一種微量核酸檢測方法，其特征在于：待測核酸的終濃度在10-2000pg/μL范圍內效果較好。

7.根據權利要求書1所述的一種微量核酸檢測方法，其特征在于：核酸與UltraPower核酸染料的反應容器為透明的PCR管、八連管等質地均勻的透明薄壁管。

8.根據權利要求書1所述的一種微量核酸檢測方法，其特征在于：用于分析DNA濃度的計算機程序為pgdetect程序。