[發明專利]一種酶制劑的制備方法

無效

• 申請號: 201010114629.0
• 申請日: 2010-02-26
• 公開（公告）號: CN101775378A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: 吳根福
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N1/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種酶制劑的制備方法，具體是一種硫化氫產生酶制劑的制備方法，制備的酶制劑對治療因內源性硫化氫產生不足而引起的疾病具有潛在的應用價值。

技術背景

長期以來，硫化氫一直被認為是一種有毒的氣體。然而最近研究表明，硫化氫作為氣態信號分子在多種生理過程中發揮重要作用，具有廣泛的生物學效應，顯示出極大的治療性應用前景。

正常情況下，機體的穩態可通過神經和體液系統進行內源調節。一氧化氮和一氧化碳是兩類早已確認的內源氣態調節因子，最近，硫化氫被證實為第三種氣態信號分子，共同參與穩態的調節。研究表明，正常機體組織中存在著一定濃度的硫化氫(如大鼠血清中約含46μM硫化氫，哺乳動物腦組織中約含50-160μM硫化氫，哺乳動物胃腸道中的硫化氫濃度更高，達0.2～3.4mM)，它們1/3以氣態形式存在，2/3以離子(主要是HS^-)形式存在。這些內源性硫化氫主要由兩類磷酸吡哆醛依賴性酶：胱硫醚β-合成酶(cystathionine?β-synthase，CBS，EC?4.2.1.22)和胱硫醚γ-裂解酶(cystathionine?γ-lyase，CGL；又稱為γ-胱硫醚酶，γ-cystathionase，CSE，EC?4.4.1.1)催化產生。硫化氫可直接作用于K_ATP通道，通過減少細胞外Ca²⁺的內流及促進內皮細胞釋放內皮超極化因子等方式來舒張血管平滑肌，同時，還可通過對絲裂原激活蛋白激酶的作用抑制血管平滑肌細胞增殖，促進其凋亡，改善血管重構。

硫化氫的主要生理功能有：

維持血壓穩定：研究表明，自發性或誘發性高血壓大鼠的血漿中硫化氫濃度顯著低于正常大鼠，如果靜脈注射或腹腔注射NaHS(一種硫化氫的供體)，不僅可提高血漿中的硫化氫水平，還能顯著降低大鼠的血壓(Shi?et?al.，AmericanJ?Physiology-Heart?and?Circulation?Physiology.2007，293：2093-2100)。對正常大鼠體外灌注胱硫醚β-合成酶或胱硫醚γ-裂解酶的激活劑，可使受試動物的血壓降低，反之，如果灌注這些酶的抑制劑，則會使受試動物的血壓升高(Webb?et?al.，J?Pharm?Experiment?Threapeut.2008，324：876-882)。Yang等用敲除CSE基因的突變小鼠進行實驗，發現這種突變小鼠其硫化氫的水平顯著下降，并表現出明顯的高血壓傾向和依賴內皮的血管舒張功能喪失，如果靜脈注射或腹腔注射NaHS，可使血壓回歸正常(Science，2008，322：587-590)，這些研究都說明硫化氫在血管擴張和血壓調節過程中發揮著重要作用。

保護心臟：心肌缺血損傷的大鼠其血漿硫化氫水平顯著降低，心肌CSE活性下調，外源性給予NaHS可以改善左室收縮功能和舒張功能、降低心肌缺血損傷大鼠的死亡率，還可減少心肌纖維原細胞的增生和肥大，減少脂質過氧化作用(Jiet?al.，Eur?J?Pharmacol.2008，587：1-7)。在大鼠心肌缺血/再灌注模型中，缺血前15min預先給予NaHS能明顯保護心臟功能，減少心肌梗死面積，抑制血管內皮細胞凋亡，促進內皮細胞再生(Bliksoen?et?al.，Eur?J?Cardiothorac?Surg.2008，34：344-349)，說明硫化氫對缺血心肌具有保護作用。

防止動脈粥樣硬化：研究表明，動脈粥樣硬化的模型小鼠中血漿硫化氫水平明顯降低，硫化氫濃度與動脈粥樣硬化的嚴重程度具有明顯相關性，腹腔注射NaHS后，血清中硫化氫的含量明顯升高，主動脈根部動脈粥樣硬化斑塊明顯縮小(王燕飛等.中國藥理學通報.2008，24：1293-1296)，提示硫化氫可以延緩動脈粥樣硬化的進程。