[發(fā)明專利]一種酶制劑的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010114629.0
• 申請(qǐng)日: 2010-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN101775378A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳根福
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/00
• 分類號(hào): C12N9/00;C12N1/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.一種酶制劑的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟是：

(1)從自然環(huán)境中取土樣或水樣，用稀釋涂布法分離出單菌落，將分離得到的各單菌落分別接種至不同的試管中，在25～37℃條件下培養(yǎng)；試管中裝有已滅菌的硫化氫產(chǎn)生培養(yǎng)基，試管口夾有經(jīng)濃度為0.8～1.5％(w/v)的醋酸鉛溶液浸泡并烘干的無菌濾紙條；選取在最短的時(shí)間內(nèi)能使濾紙條變黑的菌株作為硫化氫產(chǎn)生酶制劑的生產(chǎn)菌種；

所述的硫化氫產(chǎn)生培養(yǎng)基的配方是每1000毫升硫化氫產(chǎn)生培養(yǎng)基中含牛肉膏2.5～3.5克、蛋白胨8～12克、氯化鈉4～6克、L-半胱氨酸0.15～0.25克，余量為水，pH值為7.0～7.5；

(2)將篩選得到的硫化氫產(chǎn)生菌株進(jìn)行逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)至發(fā)酵所需的菌種量，每級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的接種量為1～10％(v/v)；然后在25～37℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)18～48小時(shí)；

所述的發(fā)酵培養(yǎng)采用發(fā)酵罐通氣攪拌培養(yǎng)，發(fā)酵罐罐壓0.03～0.06Mpa，通氣量為1∶0.3～0.5(v/v)，發(fā)酵罐攪拌速率為200～350轉(zhuǎn)/分；

(3)將發(fā)酵培養(yǎng)后的硫化氫產(chǎn)生菌培養(yǎng)液在4000～12000g的轉(zhuǎn)速下離心10～20分鐘，收集細(xì)胞；

(4)將細(xì)胞用1～10倍體積的pH為7.0～8.0的緩沖液懸浮，然后破碎細(xì)胞，得到硫化氫產(chǎn)生酶的液態(tài)酶制劑；

(5)將液態(tài)酶制劑進(jìn)行干燥，得到粉末狀固態(tài)酶制劑。

2.如權(quán)利要求1所述的一種酶制劑的制備方法，其特征在于所述的緩沖液為磷酸緩沖液或Tris-HCl緩沖液。

3.如權(quán)利要求1所述的一種酶制劑的制備方法，其特征在于步驟(4)中破碎細(xì)胞的方法采用超聲波破碎法或高壓勻漿法。

4.如權(quán)利要求1所述的一種酶制劑的制備方法，其特征在于步驟(5)中液態(tài)酶制劑干燥的方法采用真空干燥方法或冷凍干燥方法。