[發明專利]一種利用轉基因不定根繁殖根結線蟲的方法

無效

• 申請號: 201010113861.2
• 申請日: 2010-02-25
• 公開（公告）號: CN101899470A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 向太和;孟莎莎;王琳
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/06;A01K67/033
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種利用轉基因不定根繁殖根結線蟲的方法，所述方法包括：

(1)用發根農桿菌K599侵染帶有傷口的黃瓜子葉，侵染后的黃瓜子葉于含乙酰丁香酮25mg/L的MS培養基中共培養2～3天后，用含頭孢霉素500mg/L的MS培養基清洗，再轉入含卡那霉素50mg/L+頭孢霉素500mg/L的MS培養基中進行誘導培養，誘導出的不定根經除菌和繁殖，獲得轉基因不定根于MS培養基中繁殖保存；

(2)分離根結線蟲的卵囊，經消毒后接種至培養于MS培養基中的轉基因不定根上，于20～25℃下進行培養30～50天，在形成的根結中獲得根結線蟲。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)方法如下：番茄苗接種根結線蟲培養40～50天后，挑取根上的根結線蟲卵囊，用0.1％升汞消毒5min，無菌水清洗后，接種至轉基因不定根進行培養。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述發根農桿菌K599為野生型發根農桿菌K599或重組發根農桿菌K599，所述重組發根農桿菌K599含有下列之一的質粒：(1)pBIN-35S-GFP、(2)pBI121、(3)pCAMBIAL300、(4)pCHS、(5)pKH200。