[發(fā)明專利]一種克倫特羅檢測(cè)試劑盒及其使用方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010110564.2
• 申請(qǐng)日: 2010-02-12
• 公開（公告）號(hào): CN101776684A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖理文;胡佳駿;郭曉梅;李康;董國(guó)秀;蔡曉帆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海優(yōu)你生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/535
• 分類號(hào): G01N33/535;G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 北京金信立方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11225
• 代理人: 徐琳;朱梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種檢測(cè)尿液、動(dòng)物組織(肌肉、心臟、肝臟)、血清、飼料等中的克倫特羅的酶聯(lián)免疫試劑盒和其使用方法。

背景技術(shù)

克倫特羅(Clenbuterol，CLE)，俗稱“瘦肉精”，化學(xué)名為“2-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇鹽酸鹽”，藥品名為“克喘素”是一種β-興奮劑。因其能改善脂肪型動(dòng)物的肉與脂肪的比例，并能加速動(dòng)物生長(zhǎng)，而被廣泛添加于動(dòng)物飼料中，并且可以殘留在動(dòng)物的體內(nèi)。經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，克倫特羅的毒性并不很強(qiáng)，但因其半衰期長(zhǎng)，在體內(nèi)代謝慢等原因，人體對(duì)其的耐受量非常小，治療用藥時(shí)也都十分慎重，用量過(guò)大或無(wú)病用藥則會(huì)導(dǎo)致肌肉震顫、心悸、戰(zhàn)栗、頭痛、惡心、嘔吐等癥狀。由于這種藥物對(duì)人有嚴(yán)重的副作用，輕則導(dǎo)致心跳及心率不正常，重則可引發(fā)心臟病。目前，我國(guó)已禁止其使用。而在生產(chǎn)上，一些不法生產(chǎn)者在育肥豬(60～70Kg以上)飼料中添加，連用至宰前。由于克倫特羅飼用濃度是治療用量的10倍以上，停藥期短(如果停藥造成受體調(diào)節(jié)減弱，脂肪在皮下和內(nèi)臟補(bǔ)償性蓄積，瘦肉率下降)，更重要的是它的化學(xué)結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，因此在肝、肺等動(dòng)物內(nèi)臟器官殘留量很大。另外，克倫特羅能耐受100℃高溫，經(jīng)126℃油煎5min才會(huì)破壞減半，常規(guī)烹調(diào)對(duì)肉食品中克倫特羅殘留起不到破壞作用，因而人類食用后會(huì)發(fā)生中毒。

早在上世紀(jì)80年代就有學(xué)者開始對(duì)于克倫特羅的定量檢測(cè)和分析研究，上述分析技術(shù)發(fā)展至今已經(jīng)20余年。通常，檢測(cè)克倫特羅的主要方法有分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)等。這些方法由于儀器設(shè)備復(fù)雜、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、過(guò)程繁瑣、檢測(cè)費(fèi)用昂貴等原因，不適合現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣本篩查。

1993年Boyd等人(D.Boyd，P.Shearan.J.P.Hopkins?andM.O’Keeffe.Application?of?matrix?solid?phase?dispersion?for?the?determinationof?clenbuterol?in?liver?samples[J]，Analytica?Chimica?Acta，1993，27(5)：221-226.)應(yīng)用基質(zhì)固相分散法與放免法結(jié)合對(duì)肝臟中克倫特羅殘留作了檢測(cè)。檢測(cè)中用³H標(biāo)記克倫特羅，檢測(cè)限達(dá)0.5ng/g，回收率大于70％，上述方法的應(yīng)用開創(chuàng)了免疫檢測(cè)分析克倫特羅殘留的先河。放免法檢測(cè)克倫特羅殘留具有很好的特異性和高度靈敏度。但由于對(duì)條件要求比較苛刻且放射性同位素對(duì)工作人員有一定傷害，因而限制了該法的廣泛應(yīng)用。

隨后發(fā)展起來(lái)的熒光免疫分析法(FIA)同放免法相比，克服了放免法中的核輻射缺點(diǎn)。Bacigalupo等(M.A.Bacigalupo，A.Lus，G.Meroni?Dovis?andE?Petruzzlli.Comparison?of?time-resolved?fluroimmunoassay?an?dimmmunoenzymometricassay?for?clenbuterol[J].Analyst，1995，120(8)：2269-2271.)利用單抗技術(shù)與熒免分析技術(shù)檢測(cè)了克倫特羅在牛尿中的殘留，檢測(cè)線性范圍10～10⁵pg，檢測(cè)限10pg。與色譜法相比，熒光免疫法檢測(cè)克倫特羅殘留具有特異性高，穩(wěn)定性好，對(duì)樣品處理要求比較簡(jiǎn)單及一次可檢測(cè)多個(gè)樣品等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是對(duì)溫度的強(qiáng)烈依賴性和熒光強(qiáng)度取決于激發(fā)波長(zhǎng)。

標(biāo)記免疫分析技術(shù)是“邁向21世紀(jì)的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)”之一，其發(fā)展趨勢(shì)是：新標(biāo)記物的發(fā)展與聯(lián)合應(yīng)用、單克隆以及基因工程抗體的應(yīng)用及免疫放大技術(shù)，可明顯提高檢測(cè)特異性，敏感度可達(dá)zepto(10^-20)、yocto(10^-24)水平，即可實(shí)現(xiàn)分子水平的檢測(cè)。