[發明專利]一種氧化型低密度脂蛋白的制備方法及應用技術

無效

• 申請號: 201010109973.0
• 申請日: 2010-02-03
• 公開（公告）號: CN101787076A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 宮海濱;徐鎖平;蘇景力;王潔;龐慧;李春梅
• 申請（專利權）人: 徐州市心血管病研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;G01N33/53;G01N1/28;G01N1/30;G01N1/42
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 何君

1.一種氧化型低密度脂蛋白的制備方法，其特征是：它包括提取正常人血清，經高速離心機離心，去除上層乳糜微粒后調節密度，超速離心機離心兩次，取上層低密度脂蛋白，瓊脂糖凝膠電泳鑒定，然后催化氧化得到氧化型低密度脂蛋白，經瓊脂糖凝膠電泳及MDA試劑盒測氧化值，BCA法測定蛋白濃度。

2.根據權利要求1所述的一種氧化型低密度脂蛋白的制備方法，其特征是：所述的催化氧化為用硫酸銅催化氧化，濃度為1～10μmol·L^-1。

3.根據權利要求1所述的一種氧化型低密度脂蛋白的制備方法，其特征是：所述的BCA法測定蛋白濃度是將大鼠分離的心肌細胞分別培養在90個培養皿中(每皿含培養液2mL)，培養密度為2×10⁵個心肌細胞/皿，隨機選30個培養皿為空白對照組(其中加入相應體積的PBS緩沖液使低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白終濃度為0μg·mL^-1)，分別孵育0h、6h、12h、24h、48h；再選30皿為低密度脂蛋白對照組(加入低密度脂蛋白使其終濃度為120μg·mL^-1)，分別孵育0h、6h、12h、24h、48h；其余30皿為實驗組(加入氧化型低密度脂蛋白使其終濃度為120μg·mL^-1)，分別孵育0h、6h、12h、24h、48h，用ELISA法檢測細胞培養液上清中TGF-β1和bFGF濃度，留取細胞培養上清，在3000轉/min下離心10min后凍存于-80℃，用ELISA試劑盒檢測各組培養液中的TGF-β1、bFGF濃度。。

4.一種權利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白的應用技術，其特征是：將PBS緩沖液、低密度脂蛋白及氧化型低密度脂蛋白經大鼠尾靜脈注入其血管內，每天注射一次，空白對照組中注射相應體積的PBS緩沖液，實驗組注射氧化型低密度脂蛋白(血漿中終濃度為40μg·mL^-1)，低密度脂蛋白對照組中注射相同濃度的低密度脂蛋白。分別于第1、7、14、21及28天，在麻醉狀態下取出實驗大鼠心臟，用冰凍生理鹽水沖洗干凈，取心室肌放入4％多聚甲醛中固定，常規石蠟包埋，切片厚度為5μm，每個石蠟塊取10張切片進行Masson染色，普通光鏡觀察形態學改變，圖像采用Image?pro?plus?6.0圖像分析處理軟件手動計算綠色纖維和紅色膠原的面積，計算膠原容積分數，用ELISA法檢測血漿中P?I?CP濃度，分別于第1、7、14、21及28天采血，在3000轉/min下離心10min后得到血漿，-80℃凍存，用ELISA試劑盒檢測血漿P?I?CP濃度。